[发明专利]一种油田化学剂的生物毒性评价方法

说明书

本发明公开了一种油田化学剂生物毒性评价方法，包括如下内容：（1）发光菌复苏：将发光菌用氯化钠溶液配制成菌悬液，于冰水浴中复苏；（2）同步化培养：将复苏菌悬液接种于活化培养基中，进行活化培养；活化培养后期，在菌体培养液中加入生长抑制剂，进行同步培养；经同步培养后，收集菌体细胞；（3）毒性评价：用氯化钠溶液将菌体细胞配制成具有一定发光量的菌悬液，并添加发光促进剂，用于毒性评价分析。本发明方法通过菌种复苏、同步化培养、稳态筛选等方式获得具有较高发光稳定性的供试发光菌；在毒性检测过程中，加入发光促进剂，从而削弱了个体发光差异，保证了毒性评价结果的稳定性和重现性。

技术领域

本发明属于环保技术领域，涉及一种对油田化学剂的生物毒性评价方法。

背景技术

随着世界范围内环境保护法律法规的日益严格及公众环境意识的日益强烈，油田化学剂（主要包括钻井液添加剂及体系、完井液添加剂及体系、油田污水处理剂等）的环境保护评价问题受到了普遍关注和重视。在国外，如美国、英国、加拿大、挪威、荷兰等都制定了有关油田化学剂（主要是钻井液及其废弃物）的环境保护指标。在我国，油田化学剂的生物毒性问题日益受到重视，已经开展了废弃钻井液对海洋生物的毒性测试，并初步建立了油基钻井液毒性评价的实验程序，但关于油田化学剂生物毒性测试方法的研究却起步较晚。油田化学剂生物毒性测试方法的研究始于九十年代初期，迄今为止，尚无统一的油田化学剂生物毒性测试方法标准与分级标准。

1995年国家环保局颁布了《水质急性生物毒性发光细菌法》即国标GB/T 15441-1955，并于1995年3月1日开始在全国实行。它是测定水质急性生物毒性的标准方法。中国石油环境监测总站以《水质急性生物毒性发光细菌法》为基础，参照EPA糠虾生物试验法，建立了利用发光细菌法测定钻井液及添加剂生物毒性的测试方法和生物毒性分级方法，并以此为基准起草并建立了中国石油天然气集团公司企业标准Q/SY111—2007，即《油田化学剂、钻井液生物毒性分级及检测方法 发光细菌法》。

发光细菌法是基于毒性物质对发光细菌的发光度的抑制效果而设计的一种评价方法，具有操作简便，检测周期短，易于现场操作等特点，被多个行业广泛采用。CN201110090246.9公开了一种发光菌毒性的测定方法，该方法包括以下步骤：1)菌种活化：将明亮发光杆菌的冻干粉溶解，接种到斜面上传代3次后可用；2)菌种的培养：将传代好的菌种用接种环接种到液体培养基，20℃，180rpm培养12h；3)菌液的平衡：移取适量菌液到20mL3％ NaCl溶液中，控制光值测定范围在50-500万之间，20℃条件下搅拌40min；4)加样及发光强度检测：将搅拌了40min的菌液用连续进样器加入200μL到800μL的3％ NaCl空白及800μL浓度梯度的3％ NaCl污染液，加样后立即在旋涡混匀器上混匀2min，20℃条件下，静置15min后将样品管置入荧光检测器中测定发光强度；5)双交错对照法计算样品对发光强度的抑制率。CN201010537039.9公开了一种发光细菌菌种的长期保存、快速复苏的方法。通过开发专门的细菌冻存培养基和复苏溶液，实现发光细菌菌种的长期保存和快速复苏，既节省了测试成本，也大大缩短了毒性测试的时间，为化学污染物的快速毒性测试提供了可能。

目前油田化学剂的生物毒性等级判断主要是基于化学剂对发光细菌的发光量抑制程度。由于发光细菌具有自主的代谢及条件反射机制，发光量作为生物毒性唯一的检测指标，其受菌体生长代谢及环境影响很大，准确量化的难度很大，因此发光细菌检测方法的稳定性、重现性不高。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种油田化学剂生物毒性评价方法。该方法通过菌种复苏、同步化培养、稳态筛选等方式获得具有较高发光稳定性的供试发光菌菌悬液；在毒性检测过程中，加入发光促进剂，从而削弱了个体发光差异，保证了毒性评价结果的稳定性和重现性。

本发明油田化学剂生物毒性评价方法，包括如下内容：

（1）发光菌复苏：将发光菌用氯化钠溶液配制成菌悬液，于冰水浴中复苏；