[发明专利]一种检测LP的胶乳增强免疫比浊试剂盒

权利要求书

1.一种检测LP的胶乳增强免疫比浊试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、EDTA、增凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2由交联LP抗体的聚苯乙烯胶乳微球、缓冲液2、稳定剂2、防腐剂2、保护剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与LP抗体之间以共价交联方式连接，缓冲液1为包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸的水溶液，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3.5－7.5g/L，缓冲液的pH值为7.2－7.6，各组分在缓冲液1中的浓度为：

所述缓冲液1的溶剂为水；所述试剂R2中的缓冲液2选自PBS缓冲液、硼砂缓冲液、甘氨酸缓冲液、Hepes缓冲液、GOODS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或几种，其pH为7.0～9.0，浓度为25～500mmol/L。

2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醛基或环氧基，聚苯乙烯乳胶微球的粒径在100～600nm。

3.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的稳定剂1选自KCl、NaCl、CaCl中的一种或多种的组合，其质量浓度为0.5％～10％；所述试剂R2中的稳定剂2采用离子稳定剂和悬浮稳定剂配合使用；其中离子稳定剂为NaCl、KCl、Na₂CO3、Na₂SO4或K₂SO4，悬浮稳定剂为PEG8000、蔗糖、甘油或葡萄糖。

4.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的防腐剂1为叠氮钠、硫柳汞或者ProClin300；所述试剂R2中的防腐剂2为叠氮钠、硫柳汞或ProClin300。

5.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的增凝剂为PEG8000或者葡聚糖。

6.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述聚苯乙烯乳胶微球为表面官能团为羧基的聚苯乙烯胶乳微球。

7.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的LP抗体为鼠抗人LP抗体、山羊抗人LP IgG抗体或兔抗人LP IgG抗体的一种或多种的组合。

8.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的保护剂1为牛血清白蛋白；所述试剂R2中的保护剂2为牛血清白蛋白。

9.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述EDTA浓度为10～100mmol/L。

10.如权利要求1-9任一权利要求所述的检测LP的胶乳增强免疫比浊试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)试剂R1的制备：

在缓冲液1中加入稳定剂1、增凝剂、防腐剂1、保护剂1和EDTA，搅拌混合均匀，即得试剂R1；

(2)试剂R2的制备：

步骤一：将LP抗体进行4℃透析，再用缓冲液将LP抗体稀释至2mg/ml，得到LP抗体稀释液；将聚苯乙烯胶乳微球用蒸馏水离心、洗涤3次；

步骤二：用缓冲液将经过步骤一洗涤后的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％，再加入质量浓度为0.01％-0.1％的EDC，在室温下搅拌反应30min，反应结束后15000rpm离心洗涤以除去未反应的EDC，然后加入步骤一得到的LP抗体稀释液，室温下搅拌反应30min，再加入终止液终止反应，将得到的反应液15000rpm离心，用缓冲液2洗涤沉淀，重复离心洗涤3次，最后加入缓冲液2、防腐剂、稳定剂、保护剂搅拌混合均匀即得试剂R2。