[发明专利]芫荽花对称性基因CsCYC2及其植物表达载体和构建方法

权利要求书

1.芫荽(Coriandrum satium L.)花对称性基因CsCYC2，该基因的序列为SEQ ID NO.1。

2.权利要求1所述芫荽花对称性基因CsCYC2的应用。

3.权利要求1所述芫荽花对称性基因CsCYC2的重组质粒，其特征在于，由权利要求1所述的芫荽花对称性基因CsCYC2与pMD18-T Vector重组构成的pMD18-T Vector- CsCYC2重组质粒。

4.权利要求1所述芫荽花对称性基因CsCYC2的植物表达载体，其特征在于，所述的植物表达载体为由权利要求1所述的芫荽花对称性基因CsCYC2与pMD18-T Vector重组构成的pMD18-T Vector- CsCYC2重组质粒双酶切后连接到线性化的pCAMBIA 1300s质粒而得到的。

5.权利要求4所述芫荽花对称性基因CsCYC2的植物表达载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

1）芫荽花对称性基因CsCYC2序列的克隆

 以芫荽小花蕾为材料，提取总RNA，反转录为cDNA，设计上游引物CsCYC2F，终止密码子处设计下游引物CsCYC2R；利用以上设计的引物，从cDNA中扩增得到CsCYC2基因开放阅读框ORF，基因序列为SEQ ID NO.1;

上游引物CsCYC2F: SEQ ID NO.10

下游引物CsCYC2R: SEQ ID NO.11

2) 植物表达载体pCAMBIA 1300s- CsCYC2的构建

   将CsCYC2基因连接到pMD18-T Vector载体中，转化至大肠杆菌TOP10菌株中,从TOP10菌株中提取pMD18-T Vector- CsCYC2重组质粒，BamHI和SalI双酶切后回收CsCYC2基因片段，同时将pCAMBIA 1300s双元载体质粒利用BamHI和SalI双酶切线性化，利用T4连接酶与回收的CsCYC2基因片段进行连接，然后转化农杆菌感受态细胞，提取阳性质粒，测序验证，植物表达载体pCAMBIA 1300s-CsCYC2构建成功。