[发明专利]芫荽花对称性基因CsCYC2及其植物表达载体和构建方法

说明书

一、技术领域

本发明属于分子生物学领域，公开了芫荽花对称性新基因CsCYC2及其表达载体和构建方法。

二、背景技术

被子植物的花不对称性是由多个基因所共同控制的，其中控制花背腹不对称性的为TCP转录因子的CYC类基因，其功能在被子植物中是相对保守的。有趣的是所有分离到的控制花背部属性的TCP基因都属于CYC2类基因。因此，该研究表明了广义CYC类基因与核心真双子叶植物的形态建成关系密切。

而伞形科植物属于蔷薇亚纲，它具有典型的伞形花序，而在一个小伞形花序中，处于中央位置的小花和边缘小花的对称性又有所不同，分别为辐射对称花和两侧对称花，中间还存在过渡类型的小花，这为花对称性的研究提供了独特的材料。本项目选用一种代表性的伞形科植物-芫荽作为研究对象，采用RACE-PCR技术分离控制芫荽花不对称性的CYC类基因，然后利用转基因等技术，研究CYC类基因的表达和功能分化，为阐明伞形科植物花不对称性的分子机制提供依据，并对花不对称性基因在不同亚纲的花序类群中可能存在的功能分化进行初步探讨。

在作物的遗传转化途径中，农杆菌介导法是应用最为广泛的方法之一，其中有效的植物表达载体至关重要。将控制花发育的基因构建植物表达载体，用于农杆菌介导的植物遗传转化，使该转录因子在CaMV35S启动子的启动下超量表达，并调控下游目的基因的表达，改变植物形态建成，具有重要意义。

三、发明内容

技术问题

本发明的目的在于为改良植物花不对称性性，提供一个芫荽花不对称性发育基因CsCYC2，该基因的序列为SEQ ID NO.1。

本发明的另一目的在于提供芫荽花不对称性发育基因CsCYC2的植物表达载体。

本发明的又一目的在于提供芫荽花不对称性发育基因CsCYC2植物表达载体的构建方法。所构建的植物表达载体可直接用于农杆菌介导的作物遗传转化，创制新花型、新种质，可用于植物品种改良。

技术方案

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

芫荽花不对称性发育基因CsCYC2，该基因的序列为SEQ ID NO.1。所述基因可直接用于植物品种改良，创制新花型、新种质。

芫荽(Coriandrum satium L.)花对称性基因CsCYC2，该基因的序列为SEQ ID NO.1。

所述芫荽花对称性基因CsCYC2的应用,可直接用于农杆菌介导的遗传转化，改变植物花对称性。

所述芫荽花对称性基因CsCYC2的重组质粒，其特征在于，由所述的芫荽花对称性基因CsCYC2与pMD18-T Vector重组构成的pMD18-T Vector-CsCYC2重组质粒。

所述芫荽花对称性基因CsCYC2的植物表达载体，为所述的芫荽花对称性基因CsCYC2与pMD18-T Vector重组构成的pMD18-T Vector-CsCYC2重组质粒双酶切后连接到线性化的pCAMBIA 1300s质粒而得到的。

芫荽花不对称性发育基因CsCYC2植物表达载体的构建方法，包括如下步骤：

1、芫荽花对称性基因CsCYC2序列的克隆

以芫荽小花蕾为材料，提取总RNA，反转录为cDNA，设计上游引物CsCYC2F，终止密码子处设计下游引物CsCYC2R；利用以上设计的引物，从cDNA中扩增得到CsCYC2基因开放阅读框ORF，基因序列为SEQ ID NO.1；

上游引物CsCYC2F:SEQ ID NO.10

下游引物CsCYC2R:SEQ ID NO.11

2、植物表达载体pCAMBIA 1300s-CsCYC2的构建

将CsCYC2基因连接到pMD18-T Vector载体中，转化至大肠杆菌TOP10菌株中,从TOP10菌株中提取pMD18-T Vector-CsCYC2重组质粒，BamHI和SalI双酶切后回收CsCYC2基因片段，同时将pCAMBIA 1300s双元载体质粒利用BamHI和SalI双酶切线性化，利用T4连接酶同回收的CsCYC2基因片段进行连接，然后转化农杆菌感受态细胞，提取阳性质粒，测序验证，植物表达载体pCAMBIA 1300s-CsCYC2构建成功。

将CsCYC2基因的植物表达载体用于农杆菌介导的植物遗传转化，方法如下：(1)农杆菌菌株感受态制备及冻融法转化；(2)拟南芥花序浸染及种子筛选；(3)PCR鉴定及植物形态观察。

有益效果