[发明专利]一种猪瘟病毒基因重组腺病毒载体疫苗病毒含量测定方法

权利要求书

1.一种用于检测猪瘟病毒的荧光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含有如下的组分：

1)一抗：用于检测CSFV的单因子血清抗体；

2)二抗：FITC标记的山羊抗兔IgG；

3)阳性对照样品：猪瘟兔化弱毒株；

4)固定液：按丙酮与甲醇体积比1：1配置；

5)PBS洗液:Nacl 8.0g/L；Kcl 0.2g/L；Na₂HPO₄3.58g/L；KH₂PO₄0.24g/L。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的检测CSFV的单因子血清抗体，其制备方法如下：将CSFV基因重组腺病毒载体疫苗强化免疫SPF兔后，用猪瘟兔化弱毒株进行攻毒，选择攻毒后无反应热的SPF兔采集血清制备而成。

3.权利要求1所述的试剂盒在检测猪瘟病毒基因重组腺病毒载体疫苗中的病毒含量的应用。

4.一种检测猪瘟病毒基因重组腺病毒载体疫苗中的病毒含量的方法，其特征在于，所述的方法是将猪瘟病毒基因重组腺病毒载体疫苗进行连续10倍梯度稀释，在培养板每孔逐滴取100μl稀释的疫苗液接种于在5％CO₂、37℃孵育2～3小时的HEK293细胞上，继续培养48小时后，利用构建的检测CSFV的荧光免疫检测试剂盒进行间接免疫荧光检测，通过计算显微镜下视野中阳性细胞的平均个数计算疫苗中的病毒含量。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的阳性细胞为出现绿色荧光的细胞。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的计算疫苗中的病毒含量的步骤如下：

1)计算显微镜下视野中阳性细胞的平均个数。选择一个梯度，此梯度视野中有5-50个阳性细胞，随机选择至少5个区域计数；

2)计算24孔板中每孔视野数；

3)按疫苗病毒滴度(IFU/ml)＝(平均阳性细胞数/每孔视野数)×(稀释比例)/(0.1ml)进行计算疫苗中病毒含量。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的24孔板中每孔视野数为79。