[发明专利]一种快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法

说明书

技术领域

本发明属于组织培养技术领域，涉及杂交育种方法，具体涉及一 种快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法。

背景技术

洋桔梗，株态轻盈滞洒，花色典雅明快，花形别致可爱，一致都 是国际上十分流行的盆花和切花种类之一。

洋桔梗原产美国内布拉斯加州和得克萨斯州，性喜温暖、湿润和 阳光充足。较耐寒，不耐水湿。引种到欧洲和日本通过杂交改良，现 已成为一个妖媚动人、异常新奇的花卉。其中荷兰的克·萨欣·扎登 (K.SahinZaden)公司和基夫特·布洛迈扎登(KieftBloemzaden) 公司为洋桔梗的育种和新品种的推广做了大量工作。在欧洲各国的花 店和家庭的窗台上到处可见。在日本，世界著名的花卉种子公司坂田 公司在洋桔梗育种方面取得了卓越成就。

目前，品种间杂交育种依然是花卉新品种的选育的主要方法之 一。国外洋桔梗的杂交选育已经开展了100多年，已选育大批新品种， 而国内现在还处于引种阶段，许多通过杂交手段获得杂交种技术还未 能突破，如，洋桔梗部分品种间杂交存在受精后障碍，致使杂交得不 到种子，严重影响了桔梗花色、叶色等优异基因的再组合，因此解决 这一难题对桔梗新品种选育具有重要的意义。

而利用胚培养技术来克服洋桔梗品种间受精后障碍，可以直接获 得杂交新品种。对加速洋桔梗特异遗资源应用于生产提供技术支持。

洋桔梗扦插繁殖系数比较低,另外因种子繁殖多采用的是F1代 种子，后代分离比较大，使品种混杂相当严重，因此提倡采用组培繁 殖法，使后代保持良好的性状。因此利用组织培养快速繁殖,批量生 产优质种苗具有重要的实用价值。

许多科研院所和生产单位采用洋桔梗的茎段和叶片作为外植体 用组培繁殖法进行种苗的快速繁殖。“洋桔梗的组培快繁”(周俊英， 农业科技通讯，2004,5)一文中公开了将洋桔梗种子作为外植体对其 进行快繁的技术；“植物激素在洋桔梗组培快繁中的应用效果”(詹革 胜，安徽农业通报，AnhuiAgri.Sci.Bull.2004,10(6):52-53,59)一 文中选取的是洋桔梗幼嫩叶片为外植体，采用不同的激素对其进行处 理来研究激素在洋桔梗组培快繁中的作用，可见，洋桔梗的茎段、叶 片和种子都可以作为组织培养过程中的外植体，目前还没有利用桔梗 胚作为外植体对其进行组织培养来获得品种间杂交种的研究。

发明内容

针对现状，本发明将提供一种将经过受精的胚作为外植体通过组 织培养技术来快速获得桔梗品种间杂交种的方法，不仅提供了一种全 新的获得洋桔梗新品种的方法，还能解决其继代培养变异的问题，成 活率较高，不受季节的影响，大幅度降低增殖成本，满足规模化生产 需要。

为了解决上述问题，本发明提供了一个技术方案如下：

一种快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法，包括以下步骤：

(1)将父、母本在开花前一天进行套袋隔离，第二天上午，取 新鲜的父本花粉对母本进行授粉，授粉后进行套袋隔离；

(2)摘取授粉后瘦果授粉，在超净工作台上取出子房，后将子 房用流水冲洗5～10min，再用70～75％的乙醇消毒30～50s后，置于0.1％ 的升汞溶液中4～5min，然后用无菌水冲洗5-6次，冲洗后用无菌的刀 片划开种皮，取其胚作为外植体；

(3)将外植体置于接种培养基中进行培养，每瓶接种胚胎10-15 个；35d后转入继代培养基中进行继代培养，得到幼苗后转到分化培 养基中扩繁，扩繁得到幼苗后，将幼苗转移到生根培养基中进行生根 培养，筛选获得单体植株；

(4)炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4d，待 洋桔梗苗健壮且有5-7片真叶、6-8cm高时，然后解开封口膜，炼苗6d， 移栽到经消毒的基质中，温度控制在24-26℃，前7d湿度控制在70％ 左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下；

(5)大田管理：将移栽成活的洋桔梗苗正常管理，得到杂交一 代洋桔梗新品种。

上述步骤二中，取子房的时间为授粉后8～12d。

所述步骤三中接种培养基为：MS+2，4-D 2mg/L+6-BA 1.5mg/L；

上述继代培养的培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；

上述的分化培养基组成为MS+6-BA 0.2mg/L；