[发明专利]一种快速检测植物乳杆菌ST-III的引物及其检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速检测植物乳杆菌ST-III的引物及其检测方法和试剂盒，属于生物技术领域。

背景技术

植物乳杆菌ST-III是一株典型的益生菌，自身具有降低胆固醇、降血脂、提高人体免疫力等多种益生功能。该菌株的基因组已于2010年测定并公布，同时该菌株已经作为发酵剂应用于工业生产，但目前市场相对混乱，存在大量以假乱真、以次充好的现象。目前已经确定植物乳杆菌ST-III的很多益生功能与其自身的pST-III质粒密切相关，而且pST-III质粒决定了植物乳杆菌ST-III一些特殊性质。pST-III质粒大小为53.6kbp，多拷贝，而且核苷酸序列也已经被公布测定。这些核苷酸序列的公布可以使我们了解不同益生菌的遗传结构和特点，找出不同菌株的专有特征，从而为同种细菌不同菌株间的区分和鉴定奠定基础。经分析发现pST-III质粒存在一个编码钾离子转运基因簇Kdp，此基因簇赋予植物乳杆菌ST-III极强的耐盐性，而且是目前为止在乳杆菌中仅在植物乳杆菌ST-III发现这一钾离子转运簇。这为植物乳杆菌ST-III进行分子标记，并提供特异性的检测方法提供额可能。分子检测主要是PCR方法检测具有检测速度快、灵敏度高、特异性强、成本低的优势，因此建立植物乳杆菌ST-III的PCR方法能快速的将植物乳杆菌ST-III与其它植物乳杆菌菌株区分开来，从而检测市场上以假乱真、以次充好的乳制品，对乳制品的监管，具有很强的应用价值。

发明内容

为解决上述问题，本发明采用了如下技术方案：

本发明的一个目的是提供一种植物乳杆菌ST-III菌株的特异性标记分子，其特征在于：

特异性标记分子是编码植物乳杆菌ST-III的KdpA蛋白质的基因，位于植物乳杆菌ST-III来源的pST-III质粒上。

本发明所提供的特异性标记分子，还可以具有这样的特征：

的特异性标记分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第720位至第1200位所示。

本发明的另一个目的是提供一种检测植物乳杆菌ST-III的引物对，其特征在于：

该引物对中，一条引物和植物乳杆菌ST-III菌株的特异性标记分子的序列中的一段相同，长度为15-40bp；另一条引物和植物乳杆菌ST-III菌株的特异性分子标记的序列中的一段互补，长度为15-40bp，该引物对扩增出的片段长度为200-1773bp。

本发明所提供的引物，还可以具有这样的特征，的引物对中，一条引物的序列如SEQ ID NO.2所示，另一条引物的序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明的又一个目的在于提供一种检测植物乳杆菌ST-III菌株的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括上述目的中所提供的引物对。

根据本发明所提供的试剂盒，其特征在于：

的试剂盒还包括dNTP，10×PCR缓冲液和Taq DNA聚合酶。

本发明再一个目的在于提供一种植物乳杆菌ST-III菌株的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，提取待测样品菌株中的质粒DNA；

步骤二，以步骤一所得质粒DNA为模板，以上述目的中所提供的引物对进行PCR反应；

步骤三，将步骤二所得PCR反应产物进行电泳检测，检测是否存在权利要求3或4的引物扩增出的片段。

另外，本发明所提供的植物乳杆菌ST-III菌株的检测方法，还可以具有这样的特征：

其中，步骤二中的PCR反应的反应体系包括引物对，该引物对中的两种引物的浓度均为0.5mmol/L；0.2mmol/L的dNTP；1×PCRbuffer；1.5mmol/L的Mg²⁺；0.02U/μL的Taq DNA聚合酶；以及1.0-2.0ng/μL的DNA模板。

另外，本发明所提供的植物乳杆菌ST-III菌株的检测方法，还可以具有这样的特征：

步骤二中的PCR反应程序为：95℃,3min；95℃下45s,55℃下45s,72℃下1min，进行30个循环；72℃，5min；4℃保存。

本发明的再一个目的在于提供一种上述特异性标记分子作为植物乳杆菌ST-III菌株的特征序列在检测植物乳杆菌ST-III菌株中的应用。

发明作用与效果

本发明所提供的特异性检测植物乳杆菌ST-III菌株的引物及其检测方法和试剂盒，具有如下优点：

1.检测速度快、特异性高