[发明专利]一种防控连作草莓根腐病的拮抗放线菌及其生防制剂的制备方法在审
申请号: | 201410749393.6 | 申请日: | 2014-12-09 |
公开(公告)号: | CN104403976A | 公开(公告)日: | 2015-03-11 |
发明(设计)人: | 王世梅;沈婷;王辰;徐阳春;沈标;韦中;沈其荣 | 申请(专利权)人: | 南京农业大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;C12R1/55 |
代理公司: | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人: | 徐冬涛;李晓峰 |
地址: | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 连作 草莓 根腐病 拮抗 放线菌 及其 制剂 制备 方法 | ||
技术领域
本发明涉及一种防控连作草莓根腐病的拮抗放线菌及用蚯蚓粪及麦麸固体发酵生产生防活菌制剂的方法,属于农业集约化技术领域,生防活菌制剂专用于防控连作草莓土传病害问题。
背景技术
草莓(Fragaria ananassa)是多年生草本植物,果实柔软多汁,营养丰富,富含多种维生素,被誉为“水果皇后”。因其适应性强,生育期短,结果早,经济效益高等特点而备受欢迎。草莓是设施连作栽培,草莓连作从零星发生到大面积发病只需2~3年的时间,且连作重茬严重地块发病率达80%,严重制约了设施草莓产业的发展。研究表明,草莓连作土传病害是由多种病原菌引起的综合性土传根部病害,主要有镰刀菌(Fusarium oxysporun)引起的枯萎病、大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)引起的黄萎病,丝核菌(Rhizoctonia solani)引起的立枯病、疫霉菌(Phytophthora fragariae)引起的根腐病等。目前没有防治草莓连作土传病害的有效手段,利用土壤微生物防治病害是综合防治土传病害的重要措施之一。生物防治技术满足了现代农业对环境保护、食品安全等的要求,是实现农业可持续的有效方法之一。
目前放线菌活菌制剂的常规生产多以黄豆粉、玉米粉、酵母粉等价格较高的农副产品为原料,生产成本较高,限制了放线菌活菌制剂的进一步推广应用,据报道放线菌活菌制剂生产原料占整个生产成本的30~40%,因此,选择低成本的原料是放线菌活菌制剂商业化生产及推广的关键。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防除连作草莓根腐病的拮抗放线菌。
本发明的另一目的在于提供一种放线菌生防制剂。该生防制剂防控连作草莓土传病害效率达到70%以上,确保集约化农业的顺利发展。
本发明的又一目的在于提供一种利用菌株B04制备放线菌生防制剂的方法。现有技术中的放线菌生防制剂固体发酵生产多用黄豆粉、玉米粉、酵母粉等农副产品作原料,成本较高。蚯蚓粪含有丰富的有机质、氮、磷、钾及多种氨基酸,麦麸含有丰富的蛋白质、淀粉、 脂肪、无机盐、生物素及维生素是放线菌生长发育的良好基质,用于发酵生产放线菌生防制剂成本低廉,防效可靠,利于放线菌生防制剂大范围推广应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现:
一种防控连作草莓根腐病的拮抗放线菌,该菌株B04属于吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus),其菌种保藏号为CGMCC NO.9918。该菌株于2014年11月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号),其主要生物学特性为在PDA培养基上最佳的生长温度28℃,培养5~7天,形成直径2~4mm的菌落,菌落早期呈白色,后期呈灰色,分生孢子丰富,有吸水现象。
上述的菌株B04在制备放线菌生防制剂中的应用。
一种放线菌生防制剂,是将所述的菌株B04扩大培养后接种到以蚯蚓粪和麦麸为主要原料的发酵培养基中进行发酵培养得到孢子总数≥1010个/g的放线菌生防制剂。所述发酵培养基的制备方法为:将蚯蚓粪和麦麸混合均匀后调节含水率至50%~60%、pH至8.5~9.0,每Kg基质中添加5g CaCO3,混匀后,灭菌。所述蚯蚓粪和麦麸的质量比优选为1:1~1.5。
利用所述菌株B04制备放线菌生防制剂的方法,包括以下步骤:
(1)放线菌液体种子扩大培养:取菌株B04的分生孢子,接种到液体种子培养基中,摇床培养得到放线菌液体种子;
(2)制备放线菌生防制剂:将蚯蚓粪和麦麸混合均匀后调节含水率至50%~60%、pH至8.5~9.0,每Kg基质中添加5g CaCO3,混匀后,装入固体发酵罐中灭菌后,按10%~15%(w/w)的比例接入步骤(1)制备的放线菌液体种子,发酵培养制得放线菌生防制剂。
步骤(2)中所述蚯蚓粪和麦麸的质量比优选为1:1~1.5。
上述蚯蚓粪中有机质的质量百分含量为25%~38%。
步骤(2)中所述发酵的条件为:控制罐温28~30℃、通气量1~3m3/h和罐压0.01~0.05Mpa,每隔8h搅拌一次,转速50~70rpm,搅拌20~30min。
上述的放线菌生防制剂中菌株B04孢子总数≥1010个/g。
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