[发明专利]一种人白细胞介素-29的重组变异体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明提供了一种人白细胞介素-29成熟肽第33位赖氨酸定点突变为精氨酸的重组变异体(rhIL-29L)及其制备方法，属于生物工程领域。

背景技术

人白细胞介素-29(interleukin 29，IL-29)是近年发现的一种新的细胞因子，其结构和功能与I型干扰素(interferon，IFN)相似，因此又称为IFN-λ1。

人IL-29基因定位于19号染色体长臂(19q13.13)，包含5个外显子，其基因结构与IL-10家族成员的基因结构相似，但与I型干扰素的基因结构(只含一个外显子)有明显差异。IL-29由含19个氨基酸的信号肽和181个氨基酸的成熟肽组成，其mRNA全长856bp，开放读码框为603bp。IL-29的相对分子质量约为20000～33000，有一个潜在的N-连接糖基化位点，有两个二硫键。二硫键对IL-29的正确折叠和生物学活性十分重要。

人IL-29通过与细胞膜上的受体复合物结合，起始信号的转导和发挥生物学作用。IL-29和IL-28共用一个由IL-28R1和IL-10R2组成的异二聚体受体复合物，其中IL-28R1为结合亚基，IL-10R2为辅助亚基。IL-28R1是IL-29和IL-28的共用受体中所特有的结合亚基，对IL-29的细胞应答具有特异性，辅助亚基IL-10R2是I型干扰素、IL-10、IL-22和IL-26的受体组成部分，其在造血和非造血细胞中普遍表达，对IL-29的细胞应答无特异性。

人IL-29与I型干扰素共享相同的Jak-STAT(janus kinase-signal transducer of transcription)信号传导途径，激活相同的Jak-STAT信号转导途径，促进一组共同的基因表达。IL-29首先与其受体结合形成IL28R1-IL29-IL10R2三元络合物，然后通过定位在细胞内的两条受体链转导信号，启动信号级联反应，使STAT1、STAT2、STAT3、STAT4和STAT5的酪氨酸残基磷酸化，促使ISGF3(IFN-stimulated gene factor 3complex)进入细胞核与ISRE(IFN-stimulated response element)相互作用，从而调节基因的转录。因此，IL-29表现出一些与I型干扰素相同的性质，如抗病毒、抗增殖、体内抗肿瘤以及免疫调节等生物学活性。

研究发现，人IL-29主要在上皮细胞中进行表达，在人血液、大脑、肺、胰脏及睾丸中则有低水平的表达。不同起源的造血和非造血细胞被各种病毒感染后，可诱导表达IL-29，目前已发现有麻疹病毒、腮腺炎病毒、心肌炎病毒、甲型流感病毒、仙台病毒、新城鸡瘟病毒、单链(+)RNA病毒、双链DNA病毒等可诱导感染细胞表达IL-29。

IFN是发现最早、研究最多、第一个克隆化和用于临床治疗疾病的细胞因子。目前，IFN主要用于某些肿瘤和病毒性疾病的治疗，但对不同的肿瘤和病毒性疾病的疗效差异很大，且常出现不良反应。IL-29的结构和功能与I型IFN相似，且能选择性地作用于不同类型的靶细胞，其可作为I型IFN(IFN-α、IFN-β)的替代品或辅助品用于某些疾病的治疗，在肿瘤、器官移植、自身免疫性疾病及变态反应性疾病等防治方面具有潜在的应用价值。

发明内容

本发明提供了一种人白细胞介素29成熟肽第33位赖氨酸定点突变为精氨酸的变异体(hIL-29L)及其制备方法。

本发明提供的技术方案如下：

(1)本发明的第一方面，提供一种插入了hIL-29成熟肽第33位赖氨酸定点突变为精氨酸的变异体编码基因的重组真核表达载体，将本发明所述的hIL-29变异体编码基因(SEQ ID No：2)与pPIC9K^M(源于Invitrogen公司，经本实验室改造并已申请专利，申请号为：201110410391.0)重组，获得重组真核表达载体pPIC9K^M-hIL-29L，如图1所示；该重组载体表达产物是肽链中第33位赖氨酸定点突变为精氨酸的hIL-29变异体(SEQ ID No：1)；而且，本发明将pPIC9K^M的α因子中的限制性内切酶Xho I识别位点CTC GAG与蛋白酶Kex2的识别位点GAG AAA AGA，通过PCR方法引入hIL-29变异体编码基因(SEQ ID No：2)的氨基端，使该重组真核表达载体表达的hIL-29变异体(SEQ ID No：1)的肽链不会因引入限制性内切酶位点而增加额外的氨基酸残基。