[发明专利]一种从大肠杆菌中提取纯化SOD的方法

权利要求书

1.一种从大肠杆菌中提取纯化SOD的方法，其特征在于其包括下述操作步骤：

1）菌体收集：采用离心法收集湿大肠杆菌细胞；

2）菌体匀浆：将上述大肠杆菌细胞中加入2~30倍体积的水，搅拌使大肠杆菌均匀分散为悬浮液，用高压均质机在100~1500bar匀浆2~8次；

3）粗酶液制备：向匀浆后产物加入pH7~9的聚醚酰亚胺溶液，使聚醚酰亚胺的终浓度为0.5~25g/L；搅拌均匀后加入硅藻土，硅藻土的加入量为每升克；混合均匀后用板框过滤器过滤收集滤液，即为SOD粗酶液；

或将匀浆后产物以10000~16000rpm离心，上清液用陶瓷膜微滤系统过滤得到SOD粗酶液；

4）超滤：将上述SOD粗酶液用1000~40000 Da超滤膜处理，超滤膜两侧压力不大于0.4MPa；

5）层析：将上述超滤后所得滤液通过阳离子层析柱层析，用去离子水冲洗后用5~70mM的pH4.0~9.0磷酸缓冲溶液进行洗脱，收集富含SOD的洗脱液；所述阳离子层析柱选自Q-sepharose或DEAE-sepharose层析填料；

6）脱盐：将上述富含SOD的洗脱液通过超滤或凝胶排阻层析脱盐。

2.根据权利要求1所述的一种从大肠杆菌中提取纯化SOD的方法，其特征在于重复步骤4）和5）2~5次获得高纯度的富含SOD的洗脱液。

3.根据权利要求1或2所述的一种从大肠杆菌中提取纯化SOD的方法，其特征在于步骤2）中所述水的温度为1~15℃。

4.根据权利要求1所述的一种从大肠杆菌中提取纯化SOD的方法，其特征在于步骤5）中所述磷酸缓冲液为磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲溶液。