[发明专利]一种花生种质资源果腐病抗性鉴定的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种花生种质资源果腐病抗性鉴定的方法，属于花生抗病性鉴定方法技术领域。

背景技术

花生果腐病，俗称烂果病，是世界范围内普遍发生的花生土传病害之一, 危害严重, 难于治理, 一般发病田产量损失达15%左右, 重病田可致绝收。花生抗病品种的筛选与培育是从根本上实现果腐病防控的有效途径。

但由于花生果腐病病原菌培养物土壤扩繁困难，回接难度大，尤其是不产孢的菌丝体病原菌定量回接难度极大，使得花生种质资源果腐病抗性的鉴定、比较成为制约抗病品种培育的瓶颈。病原菌Calonectria sp.（保藏号：CGMCC No. 9807）是本实验室分离纯化的一株广普性的、高致病性的花生果腐病病原菌，该菌对温度敏感、目前实验技术条件下不产孢。以此菌为接入对象，建立一种花生种质资源果腐病抗性鉴定的新方法，对将来花生果腐病病原菌的回接与抗性品种选育具有普遍指导意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种花生种质资源果腐病抗性鉴定的方法，以克服现有条件下病原菌菌丝体回接困难、难以量化等技术瓶颈。

该方法以花生果腐病病原菌Calonectria sp.为接入菌，在花生的苗期、盛花期、浆果期采用掩埋喷灌方法接入。花生种植前土壤需均质化，并按随机种植模式种植。为保证接入等量菌种，首先进行病原菌快速、大批的半定量培养，而后在各接种时期按等量接种方法接入。该方法能够同时对多个花生种质资源进行果腐病抗性的鉴定、比较，结果准确可靠，重复性好。

本发明还进一步提供了上述花生种质资源果腐病抗性鉴定方法的优选技术方案：

作为优选，所述的病原菌为Calonectria sp. 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014.10.20，保藏号为CGMCC No. 9807。该菌是从花生果腐病病果中分离纯化获得，其ITS序列与Calonectria morganii相似度为99%。

作为优选，所述的土壤均质化是指：田间种植土壤需深耕、翻匀、耙细、整平；而盆栽土壤需堆积后翻匀、等量分装；使供试土壤尽可能保证均质化。

作为优选，所述的随机种植模式是指田间种植需划分小区，每个小区1.32 m²，每个品种设置三个重复处理，小区位置随机划分。采用双粒播种，穴距15cm，大小行距80cm、30cm，垄长1.65m。盆栽试验也是每个品种设置三个重复，一个重复5棵。各处理种植、管理模式一致。

作为优选，所述的病原菌快速、大批的半定量培养是指首先将冻存菌在改良察氏培养基平板上活化，活化后采用打孔法将两个5mm的菌斑接入50ml改良察氏液体培养基中，28℃、 200rpm震荡16h进行富集培养；取1.5ml上述的富集培养液，涂布于12cm直径的改良察氏培养基平板上（培养基厚度0.5cm），存留于超净工作台晾干后，按上述方法重复涂布两次，待晾干后至于培养箱28℃暗培养。3-4天后待菌丝体布满整个平板，取出接种。

作为优选，所述的按等量接种方法接入是指在每个接种时期，菌丝体如权利要求5所述培养后，将每个平板的培养物（与培养基一起）等量分成八份，于每穴花生的主根5-10cm深处接入一份培养物，以达到等量接入且土壤扩繁的目的。

作为优选，所述的掩埋喷灌方法是指如权利要求6所述接入等量培养物后，掩埋盖土，之后于垄上两行花生之间开沟10-15cm深，采用喷灌方式浇水，一个小区需水6L，保证水量尽可能均匀。如此，满足菌丝体的土壤扩繁需求。

具体实施方式

下面通过具体实施例进一步说明本发明的技术方案，本发明包括但不限于以下实施方式。根据现有技术对本发明所进行的不脱离本发明实质内容的改变，仍属于本发明的保护范围。

实施例1：

选定17个花生品种作为参试品种，于青岛莱西花生试验基地专门的隔离地块进行田间回接试验。种植前，将该地块深耕、翻匀、耙细、整平，划分为接种和不接种两个地块，中间设立隔离带。两地块分别划定51个小区，每个小区1.32 m²，每个品种设置三个重复处理，小区位置随机划分。采用双粒播种，穴距15cm，大小行距80cm、30cm，垄长1.65m。于2014年4月28日播种。