[发明专利]一种花生果腐病病原菌的快速培养方法

说明书

本发明涉及一种花生果腐病病原菌的快速培养方法，属于花生病原菌培养方法技术领域。该方法以花生果腐病病果为材料，采用梯度稀释方法进行筛选并纯化，获得一种高致病性的花生果腐病病原菌Calonectria sp.。用打孔法将纯化的致病性病原菌转接到液体培养基上富集培养12小时，之后将富集液涂布到平板上暗培养，2天后选取单菌落进行传代培养。如此对所得纯培养进行快速传代，选取经50次传代后致病性稳定的菌株进行保藏。对冻存菌，则采用先活化、后富集、之后扩大培养的方法，以满足花生抗病品种筛选短期内的大量需求。该方法能够有效缩短真菌性病原菌的培养时间，实现快速、大量培养，对花生果腐病抗病品种的选育及抗病机制的研究具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种花生果腐病病原菌的快速培养方法，属于花生病原菌培养方法技术领域。

背景技术

花生是我国重要的油料作物和经济作物，近年来花生果腐病,俗称烂果病，在我国花生产区尤其是北方产区呈连年加重之势。果腐病是世界范围内普遍发生的花生土传病害之一,危害严重,难于治理,一般发病田产量损失达15％左右,重病田可致绝收。因此，果腐病病原菌的筛选、培养与致病性研究变得至关重要，它是花生果腐病抗病种质培育与抗病机制研究的重要基础，更是彻底实现花生果腐病防控的关键所在。

由于花生果生长于土壤中的特殊性，使得花生果表面的附着菌与内生菌多样性很高，加大了病原菌的筛选难度。而大多数真菌本身存在生长周期较长、传代慢的特点，因此要想快速获得致病性稳定的纯培养物，必须采用合适的选择性培养方法并缩短其传代周期。另外，抗病花生种质的筛选、鉴定试验尤其是田间试验必须同期内接入大量的病原菌，这对病原菌的快速、大量繁殖技术又提出新要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种花生果腐病病原菌的快速培养方法，以达到短期内获得纯培养、致病性稳定的花生果腐病病原菌的目的，并实现快速、大量繁殖，以满足花生抗病种质筛选短期内的大量需求，对花生果腐病抗病品种的选育及抗病机制的研究具有重要意义。

该方法包括如下步骤：采用打孔法将分离、纯化的高致病性花生果腐病病原菌Calonectria sp.转接到改良察氏液体培养基上富集培养，之后将富集液涂布到改良察氏培养基平板上暗培养。如此对所得纯培养进行快速传代，选取经50次传代后致病性稳定的菌株进行保藏。对冻存菌，则采用先活化、后富集、之后扩大培养的方法，实现快速、大量培养的目的，

本发明还进一步提供了上述花生果腐病病原菌的快速培养方法的优选技术方案：

作为优选，所述的花生果腐病病原菌是从花生果腐病病果中分离纯化获得，回接实验证明其具有高致病性，其ITS序列经比对与Calonectria morganii相似度为99％。该菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014.10.20，保藏号为CGMCC No.9807。