[发明专利]一种人体尿液中8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α的分析方法

权利要求书

1.一种人体尿液中8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α的分析方法，其特征在于：包括以下步骤：将解冻好的尿液1mL，在37oC下加热5min溶解可能混在沉淀中的目标化合物，加入[C¹³N¹⁵]-8-羟基鸟苷和D₄-8-异构前列腺素F2α的混合内标溶液；采用Agilent Bond EluC18固相萃取柱对尿液样品中的8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α进行净化，具体过程是：尿液上样至已活化的Agilent Bond EluC18固相萃取柱上，2ml H₂O洗涤，2ml 体积比为1∶4的甲醇/H₂O洗脱属于第一集分的8-羟基-脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷，2ml体积比为5∶5的甲醇/H₂O洗杂质，最后再用2ml体积比为3∶1的甲醇/H₂O洗脱属于第二集分的8-异构前列腺素F2α，将净化后的2个洗脱集分采用液相色谱-串联质谱（HPLC-MS /MS）方法检测8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α的浓度。

2.根据权利要求1所述的人体尿液中8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α的分析方法，其特征在于：Agilent Bond EluC18固相萃取柱使用前先通过5ml甲醇和5ml H₂O进行活化。

3.根据权利要求1所述的人体尿液中8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α的分析方法，其特征在于：HPLC-MS/MS分析条件如下：

采用规格为150 mm × 3.0 mm i.d., 2.7 μm 的Agilent Poroshell 120 SB-C18 色谱柱；柱温：30 oC；进样量：10 μL；流速：300 μL/min；流动相：A. 0.1%乙酸溶液，B. 乙腈；洗脱梯度：0 -2min，5%B，6-9 min 100%B，10-15 min，5 %B，；离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描模式：8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷-----正离子扫描，8-异构前列腺素F2α-----负离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；干燥气（N₂）温度和流速：290 oC，11 L/min；雾化器压力：40 psi；鞘气（N₂）温度和流速：400 oC，12 L/min；毛细管电压（Capillary voltage）：3500 V；碎裂电压（Fragmentor voltage）：380 V；碰撞气：N₂；雾化电压：1500V。

4.根据权利要求1所述的人体尿液中8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α的分析方法，其特征在于：所述混合内标溶液中的[C¹³N¹⁵]-8-羟基鸟苷和D₄-8-异构前列腺素F2α在待测样品溶液中的最终浓度均为10ng/ml。