[发明专利]一种人体尿液中8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α的分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种人体尿液中8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α的前处理和分析新方法，并将其用于人体尿液中氧化应激指标的评估。具体是采用Agilent Bond EluC18固相萃取柱同时净化尿液中8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α，然后采用HPLC-MS/MS技术测定尿液中8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α含量的分析方法。

背景技术

活性氧(ROS)是细胞有氧代谢过程中产生的化学性质活泼的氧自由基和能转化为自由基的物质。生物体内的ROS是机体不可或缺的物质，它的产生与消除处于动态平衡状态。在低浓度和中等浓度时，ROS起重要的生理作用，它参与机体的免疫过程，并能调节信号传导途径、控制基因表达和蛋白质翻译后的修饰等，进而参与细胞生长、分化、死亡等。但当ROS的产生和机体的抗氧化能力之间的平衡被打破而导致ROS超过生理限度时，就会损害生物大分子，如DNA、RNA氧化损伤和脂质体过氧化等，从而引起多种疾病的发生和发展。8-羟基-脱氧鸟苷，8-羟基鸟苷和-异构前列腺素F2α分别对应于DNA、RNA氧化损伤产物和脂质过氧化产物。这三种化合物为代表性的氧化应激生物标志物，分析这三种化合物的含量对于评估体内氧化损伤程度以及研究疾病病理过程都有重要作用。

目前，8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷可采用用酶联免疫法、气相色谱质谱(GC-MS)、液相色谱-电化学以及HPLC-MS/MS法进行检测，其中HPLC-MS/MS法选择性好，灵敏度高。在HPLC-MS/MS进行分析时，样品可采取直接稀释或固相萃取进行前处理净化，但由于这些化合物极性很高，在常用的反相色谱柱上基本不保留，结果导致这些化合物与其它干扰物不宜分离，造成定量干扰，并且电喷雾离子源（ESI源）对反相柱分离的极性化合物的检测并不是很灵敏，实际样品化合物灵敏度可能会低于检测限；8-异构前列腺素F2α可采用酶联免疫法，GC-MS和HPLC/MS/MS进行分析。HPLC-MS/MS法具有较好的灵敏度和选择性，适宜于8-异构前列腺素F2α的分析。但尿样中这种化合物含量较低，又存在有其他结构类似的化合物，样品通常是需要固相萃取或是液液萃取-固相萃取相结合的方式进行净化，浓缩后进行定量。

文献尽管针对3种化合物都建立了相应的HPLC-MS/MS分析方法，但对于8-羟基-脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷，有必要通过合适的样品前处理方法降低样品检测时的基质效应，提高检测的灵敏度和选择性；对于8-异构前列腺素F2α的分析，则要注重于发展高效、稳定、灵敏的前处理方法。并且三种化合物分属于两种质谱检测模式，文献通常采用不同的前处理方法（不同的SPE方法）和仪器方法（不同的色谱柱和流动相）进行分析，处理通量不大。

发明内容

本发明的目的正是针对上述现有技术所存在的不足而提供的一种人体尿液中8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α的固相萃取前处理和HPLC-MS/MS分析新方法。采用该方法可便捷地同时净化人体尿液中的8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α，并采用HPLC-MS/MS对三种化合物的含量进行定量分析。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种人体尿液中8-羟基脱氧鸟苷、8-羟基鸟苷和8-异构前列腺素F2α的分析方法，包括以下步骤：