[发明专利]一种用于治疗肺癌的中药克方10个指标成分的质量控制方法

权利要求书

1.一种用于治疗肺癌的中药克方10个指标成分的质量控制方法，步骤如下：

克方样品制备：

a. 克方药材：精密称取猫爪草5－15份、金荞麦5－15份、鱼腥草5－15份、仙鹤草5－15份、冬瓜子5－15份、山茨菇10－20份、苏木10－20份、红花10－20份、法半夏10－20份、胆南星5－15份、沙参5－15份、玉竹5－15份、麦冬5－15份共20-40g粉碎，加50%-80% 乙醇100-400ml，加热回流提取0.5-1.5h，过滤，提取3次，滤液减压浓缩至40-80 ml，取5－10 mL旋干，用70%甲醇溶解定容至25mL，过0.45μm滤膜，作为克方药材供试品溶液；

b．克方制剂：取以上克方药材提取、精制、浓缩，再加适量糊精辅料加工成颗粒剂，精密称取克方颗粒10-20g，研碎，加70% 甲醇100-200ml，超声提取0.5-1.0h，过滤，提取2次，滤液减压浓缩至20-40 ml，取5-10 mL用70%甲醇定容至25mL，过0.45μm滤膜，作为克方制剂供试品溶液；

混合对照品溶液制备：

精密称取羟基红花黄色素35.30mg、巴西苏木素12.42mg、儿茶素0.46mg、金丝桃苷0.408mg、芦丁0.55mg、异槲皮苷0.34mg、木犀草苷0.11mg、槲皮苷1.22mg、芹菜素-7-O-葡萄糖苷0.14mg、槲皮素0.24mg 10种对照品置于10 mL量瓶中，加70%甲醇使溶解并定容至刻度，制得混合对照品供试液，于4℃保存备用；

（3）色谱条件： 

色谱柱：Diamonsil C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：A-乙腈，B-1.5%冰醋酸水溶液，梯度洗脱：0~10min 4~5%A, 10~15min 5~10%A, 15~20min 10~15%A, 20~30min 15%A, 30~32min 15~18%A, 32~55min 18%A, 55~60min 18~32%A, 60~65min 32~33%A, 65~75min 33%A, 75~85min 33~35%A, 85~90min 35~37%A；检测波长：280nm、350nm；流速：1.0mL·min^-1；柱温：30℃；进样量：20μL；分析时间：90min；

（4）校正因子fkm的计算：

混合对照品溶液进样10，5，2，1，0.5μL，用高效液相色谱测定色谱图并进行峰面积积分，选取槲皮素为内标化合物，分别计算儿茶素、巴西苏木素、羟基红花黄色素A、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素-7-O-葡萄糖苷的相对校正因子fkm；

(5) 克方样品中10个指标成分的质量测定：

a. 取克方供试液注入高效液相色谱仪，按以上色谱条件测得色谱图；

b. 以槲皮素为内标，按回归方程计算槲皮素质量，槲皮素的回归方程为：Y=1.2×10⁶X-5165.8（280nm检测波长）、Y=2.6×10⁶X-2700.4（350nm检测波长）；

c. 儿茶素、巴西苏木素、羟基红花黄色素A、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素-7-O-葡萄糖苷的质量按公式计算；

公式为：Wm=(Wk×Am)/(fkm×Ak)

式中Ak为槲皮素内标物峰面积，Wk为槲皮素内标物质量；Am为被测组分m的峰面积，Wm为被测组分m的质量，fkm为儿茶素、巴西苏木素、羟基红花黄色素A、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素-7-O-葡萄糖苷的校正因子；

d. 克方药材或制剂中槲皮素、儿茶素、巴西苏木素、羟基红花黄色素A、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素-7-O-葡萄糖苷的质量分别为0.0122~0.0456 mg/g、 0.0112~0.0922 mg/g、 0.1043~1.5024 mg/g、 0.6930~1.4242 mg/g、 0.0114 ~0.1267mg/g、 0.0122~0.0851mg/g、 0.0105~ 0.0775mg/g、 0.0011~0.0315mg/g、0.0314~0.4325 mg/g、 0~0.0082 mg/g。