[发明专利]一种用于治疗肺癌的中药克方10个指标成分的质量控制方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及中医药技术领域，具体地说是一种用于治疗肺癌的中药克方10个指标成分的质量控制方法。

二、背景技术

肺癌是严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤，近年来发病率已呈明显上升的趋势，全球每年有超过100万人死于肺癌。中医中药抑制或杀伤肿瘤细胞及术后调理、减轻放疗及化疗不良反应、改善患者症状和体征、提高生活质量等方面发挥了重要作用。克金岩方(克方)是抗肺癌临床经验方，由冬瓜子、法夏、胆南星、山茨菇、猫爪草、金荞麦、鱼腥草、仙鹤草、苏木、红花、沙参、玉竹、麦冬药物组成【尹莲，张旭,叶丽红.一种抗肺癌A549细胞增殖的中药提取物及其制备方法，ZL200810195060.8】。多年来在抗肺癌临床应用中取得了很好的疗效，治愈肺癌病人无数，并有抗肺癌疗效及靶向作用机制方面的优势，目前已研制成抗肺癌中药复方制剂。

但目前中药材和制剂缺乏普适性的质量控制方法，严重制约了我国中药新药的开发及产业的发展。在中药制剂多指标成分测定的实际过程中，其无法逾越的瓶颈是缺乏部分标准品，这样就直接限制了用常规外标法或内标法实现多指标质量控制的设想。克方中抗肺癌效应物质基础已有系统研究基础，黄酮活性成分已明确【董静,尹莲,张旭，等.周氏克金岩方抗肺癌A9细胞有效部位I成分分析研究，中国中医药信息杂志，2009，16(11)：40-42；孙怡,赵沁,尹莲，等.周氏克金岩方提取部位抗A549细胞增殖的研究，南京中医药大学学报，200925(2)：107-109.】，但该制剂及相关药材均无多指标成分的质量控制方法。

因此，选择克方中抗肺癌作用明确、能代表各药材特征成分的10个黄酮成分为指标成分，建立质量控制方法，可实行克方及制剂质量控制的目的。

三、发明内容

本发明的目的在于提供一种用于治疗肺癌中药克方10个指标成分的质量控制方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种用于治疗肺癌的中药克方10个指标成分的质量控制方法，步骤如下：

(1)克方样品制备：

a.克方药材：精密称取猫爪草5－15份、金荞麦5－15份、鱼腥草5－15份、仙鹤草5－15份、冬瓜子5－15份、山茨菇10－20份、苏木10－20份、红花10－20份、法半夏10－20份、胆南星5－15份、沙参5－15份、玉竹5－15份、麦冬5－15份共20-40g粉碎，加50％-80％乙醇100-400ml，加热回流提取0.5-1.5h，过滤，提取3次，滤液减压浓缩至40-80ml，取5－10mL旋干，用70％甲醇溶解定容至25mL，过0.45μm滤膜，作为克方药材供试品溶液；

b.克方制剂：取以上克方药材提取、精制、浓缩，再加适量糊精辅料加工成颗粒剂，精密称取克方颗粒10-20g，研碎，加70％甲醇100-200ml，超声提取0.5-1.0h，过滤，提取2次，滤液减压浓缩至20-40ml，取5-10ml用70％甲醇定容至25ml，过0.45μm滤膜，作为克方制剂供试品溶液；

(2)对照品溶液制备：

精密称取羟基红花黄色素35.30mg、巴西苏木素12.42mg、儿茶素0.46mg、金丝桃苷0.408mg、芦丁0.55mg、异槲皮苷0.34mg、木犀草苷0.11mg、槲皮苷1.22mg、芹菜素-7-O-葡萄糖苷0.14mg、槲皮素0.24mg 10种对照品置于10mL量瓶中，加70％甲醇使溶解并定容至刻度，制得混合对照品供试液，于4℃保存备用；

(3)色谱条件：

色谱柱：Diamonsil C18柱(4.6×250mm，5μm)；流动相：A-乙腈，B-1.5％冰醋酸水溶液，梯度洗脱：0～10min 4～5％A,10～15min 5～10％A,15～20min 10～15％A,20～30min 15％A,30～32min 15～18％A,32～55min 18％A,55～60min 18～32％A,60～65min32～33％A,65～75min 33％A,75～85min 33～35％A,85～90min 35～37％A；检测波长：280nm、350nm；流速：1.0mL·min^-1；柱温：30℃；进样量：20μL；分析时间：90min；

(4)校正因子fkm的计算：