[发明专利]一种毛枝柳组培快繁的方法

说明书

技术领域

本发明属于属于农业生物技术领域，涉及的是一种毛枝柳的组培快繁方法。

背景技术

毛枝柳(Salix dasyclados)为灌木或小乔木，高5～8m。叶片大，呈卵圆形，属春季观芽的银芽柳类型。产自我国东北三省和西北部等省份。花序先叶开放，较大。雄花序较长，长达2.5～4cm，粗约1.8cm；花药黄色，雌花序较长，粗圆柱形，长4～5.5cm，粗1.2cm。花期4月，果期5月。冬季一年生枝条红色。

毛枝柳花序于春季展叶前开放，如同枯枝生花，是很好的春季观花树种；喜耐水湿，可作为河岸的绿化树种；枝条柔韧性好，可做编织用材。随着能源利用技术的发展，毛枝柳以其优良的表现，成为世界公认的能源树种。

毛枝柳为瑞典重要的一种发电用的能源林树种。柳树幼年生长量明显高于杨树等其它常见能源树种，适合于做超短期轮伐矮林作业系统树种，给生物质发电提供生产原材料。短的轮伐期容易保证生产原材料供应的频率，从而提高生物质发电设备的利用率。其栽植密度为每公顷1.5～2万株，轮伐期为3～5年，可达到最高产量。有研究普遍认为，柳树能源林造林，为了机械采伐的方便可采用双行栽植，株距为0.75m，行距为0.9m，双行间距为1.5m。

目前文献中尚无关于毛枝柳的组培快繁的报道。该方法为毛枝柳的快速繁殖提供了一种新的方法，为毛枝柳作为能源林和观赏柳的产业化提供了一种繁殖的新方法。

发明内容

为了改变目前毛枝柳繁殖、栽培不良的状况，本发明的目的在于加快毛枝柳的栽培和开发力度，提高毛枝柳的繁殖效率，加快毛枝柳种苗的规模化繁育，有利于毛枝柳作为能源木本植物和观赏银芽柳系列的生产和开发。本发明方法特别适用于春季生产初期采集嫩枝进行诱导丛生芽。

本发明提供一种毛枝柳组培快繁的方法，包括如下步骤：

采集毛枝柳当年生嫩茎，依次进行1)外植体消毒、2)丛生芽诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽生根培养、5)炼苗移栽，得到毛枝柳组培苗。

所述采集毛枝柳当年生嫩枝，是在春天采集毛枝柳芽萌发形成的未封顶的枝条，要求枝条木质化程度低，要求每个茎段都长有1～2个腋芽。

所述1)外植体消毒，是流水冲洗嫩茎2～3h，在超净台上用75％酒精处理30～40s，无菌水漂洗3～4次，再用0.3％升汞(二氯化汞，Mercury chloride)中消毒7min，之后无菌水漂洗3～4次，并用无菌滤纸吸去多余水分。

所述2)丛生芽诱导培养：将毛枝柳当年生嫩枝去掉叶片，剪成3cm茎段，每个茎段留1～2个芽，接种在诱导培养基上，萌发新的丛生芽，培养42d后，叶片展开；

所述的诱导培养基是以DKW为基本培养基，含有1.0mg/L(终浓度，下同)的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，benzylaminmopurine)、0.1mg/L的NAA(萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)、5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即DKW+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂粉5g/L。

所述萌发新的丛生芽，时间为接种到丛生芽诱导培养基上18d后。

所述叶片展开，时间为接种到丛生芽诱导培养基上42d后。

所述2)丛生芽增殖继代：将丛生芽接入丛生芽增殖继代培养基上，置于温度25±1℃的培养室内，每30～40d继代转瓶一次，继代3次生成生长健壮的组培苗；

所述的丛生芽增殖继代培养基是以DKW为基本培养基，含有2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L的琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即2/3DKW+IBA0.2mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂粉5g/L。

所述3)壮苗生根：将继代后大量形成的丛生芽，转入生根培养基进行生根诱导，促进生根，38d后长成带根的幼苗；

所述长成带根的幼苗，时间为接种到生根培养基上38天后。

所述生根培养基是以2/3DKW为基本培养基，含有0.2mg/L的IBA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即2/3DKW+IBA 0.2mg/L。

所述4)炼苗移栽：将带根的毛枝柳幼苗进行炼苗，移栽入基质，即培养成毛枝柳组培苗。

所述基质为草炭土：珍珠岩按体积比3∶1混合所得的基质。

所述丛生芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基、生根培养基的pH值优选为5.80。

所述的培养，培养条件为每天光照10h～12h，温度为25℃±2℃、光照12h/d、光照强度2000～3000lx。