[发明专利]一种新的血清代谢物的组合及其作为肝癌诊断标志物的用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的组合标志物在制备早期肝癌诊断试剂盒中的应用。属于分析化学及临床医学领域。

背景技术

肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是指发生于肝脏的恶性肿瘤，据统计每年肝癌新发患者约60万，其发病率居恶性肿瘤的第五位，致死率居第三位。肝癌的病因复杂，大部分是由于肝炎病毒感染引起的，在我国肝癌多在乙肝肝硬化的基础上发展而来。肝癌由于其早期症状不明显难以被发现，而对于中晚期肝癌又缺乏有效的治疗，其5年存活率为7％，而到IV阶段仅为3.9％，因此早发现、早治疗对肝癌极其重要。目前，肝癌的诊断主要有影像学检查和血清甲胎蛋白(AFP)检测，但是前者检查作用有限，往往到了中、晚期才能够发现和确诊，缺少预警价值；后者其诊断的敏感性和特异性较低，检出率一般只有50％-75％左右。因此，为了提高肝癌早期临床诊断的灵敏度和特异性，开发新的诊断方法势在必行。

有研究表明肝癌的发生和发展与多种小分子代谢紊乱密切相关，例如：氨基酸代谢，脂质代谢，胆汁酸代谢等等。本发明首次发现血清中的甘氨胆酸、色氨酸、组氨酸、尿苷、胆碱、苯甲酰胺、溶血磷脂酰胆碱16：1和苯丙氨酰色氨酸苯丙氨酰色氨酸可以作为一种新的肝癌标志物组合，并采用步进式判别法(见图1)，用于辅助诊断早期肝癌。甘氨胆酸是种甘氨酸结合型胆汁酸的胆汁，胆汁酸是一种类固醇酸，由胆固醇在肝脏中合成，可加速脂肪的代谢和脂溶性的维生素和固醇类的吸收，同时它也被认为是一种多功能的重要信号分子，在能量动态平衡、磷脂代谢、糖代谢以及细胞增殖或凋亡等整合调节中起重要调节作用[1]。胆碱是卵磷脂的基本组成部分，它是乙酰胆碱的合成前体，同时也是很多代谢过程中的甲基供体(如脂质代谢)，目前它也被认为是一个重要的维生素，涉及到脂质代 谢和葡萄糖体内平衡调节[2、3]；色氨酸是人体中常见的必需氨基酸和生糖氨基酸，有研究报道肿瘤患者中色氨酸代谢异常，可能是由于机体对恶性肿瘤做出抵抗性免疫应答或者是恶性肿瘤的免疫逃逸机制导致色氨酸的损耗[4、5]；组氨酸是一种蛋白氨基酸，在机体中组氨酸利用其咪唑环具有清除活性氧的特性来保护有炎症的组织和器官，具有抗氧化，抗炎和氧化应激的特性[6]；尿苷涉及到嘧啶代谢；苯甲酰胺是苯甲酸降解的中间物；溶血磷脂酰胆碱类代谢物对病理生理学的刺激非常灵敏，在细胞增殖、肿瘤细胞入侵和促炎、抗炎[7、8]等生理过程起着重要调控作用。鉴于此，测定血清中以上8种小分子代谢物的含量变化情况有利于了解肝细胞的代谢变化，以便辅助诊断早期肝癌。

发明内容

本发明的目的是为克服肝癌早期隐蔽性强而诊断难的问题，提供一种新的血清代谢物组合，该代谢物组合可作为标志物应用于肝癌的早期诊断。

本发明首次公开了一种能够用于肝癌早期诊断的血清代谢物的组合，该组合包括甘氨胆酸、色氨酸、组氨酸、尿苷、胆碱、苯甲酰胺、溶血磷脂酰胆碱16：1和苯丙氨酰色氨酸8种血清小分子。优选地，所述组合由甘氨胆酸、色氨酸、组氨酸、尿苷、胆碱、苯甲酰胺、溶血磷脂酰胆碱16：1和苯丙氨酰色氨酸这8种血清小分子组成。

换言之，本发明提供一种用于肝癌早期诊断的组合的标志物，其包括甘氨胆酸、色氨酸、组氨酸、尿苷、胆碱、苯甲酰胺、溶血磷脂酰胆碱16：1和苯丙氨酰色氨酸8种血清小分子，优选地，其由甘氨胆酸、色氨酸、组氨酸、尿苷、胆碱、苯甲酰胺、溶血磷脂酰胆碱16：1和苯丙氨酰色氨酸这8种血清小分子组成。

该组合的质谱靶向分析离子信息如表1所示。

表1.8种组合标志物的靶向分析的信息表

根据上述小分子代谢物的组合，采用步进式判别法(见图1)，以逻辑回归公式可应用于早期肝癌的诊断，包括对肝癌、肝硬化患者与健康人进行区分以及对肝癌及肝硬化患者进行判别。

本发明还涉及甘氨胆酸、色氨酸、组氨酸、尿苷、胆碱、苯甲酰胺、溶血磷脂酰胆碱16：1和苯丙氨酰色氨酸的血清代谢物组合在制备早期肝癌诊断试剂盒中的应用。

本发明还提供一种早期肝癌诊断试剂盒，所述试剂盒包含检测血液样品中权利要求1所述的每种血清代谢物的浓度的试剂和内标。

其中所述内标为D5-色氨酸、D3-肉碱、D5-甘氨胆酸、D8-缬氨酸、LPC 19：0和D3-脂肪酸18：0。