[发明专利]一种抗烟草花叶病毒植物黄酮类化合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种植物黄酮类化合物，其特征在于从烟草中分离得到，命名为paranicflavone A，其分子式为C₂₀H₁₄O₅，其结构式如式（Ⅰ）所示：

，式（Ⅰ）。

2.权利要求1所述的植物黄酮类化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤（1），浸膏提取：将植物样品粉碎到30~50目，以体积百分比浓度为65-75%丙酮水溶液，室温提取2~4次，每次6~10h，合并提取液，过滤，得滤液，减压浓缩得水液；

步骤（2），萃取和硅胶柱层析分离：将步骤（1）得到的水液用乙酸乙酯萃取，分别得到乙酸乙酯层和水溶液层，乙酸乙酯层减压浓缩成浸膏，然后用200~300目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用氯仿-丙酮梯度洗脱，得到A-E五部分；

步骤（3），高效液相色谱分离：步骤（1）中B部分再用体积比为15:1~2:1氯仿-丙酮进行梯度洗脱，得到B1-B6六部分；将B2部分结合高压液相色谱分离纯化及凝胶色谱分离纯化即得式（Ⅰ）所述的植物黄酮类化合物。

3.根据权利要求2所述植物黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述的步骤（1）中丙酮水溶液的体积百分比浓度为70%。

4.根据权利要求2所述植物黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述的步骤（1）中每次提取时丙酮水溶液的体积与植物样品质量比为8-12 L：1Kg。

5.根据权利要求2所述植物黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述的步骤（2）得到的浸膏在经硅胶柱层析前，用浸膏重量1.5~4倍量的95%甲醇溶解，然后用浸膏质量2-4倍的100目硅胶搅拌，至混合均匀，再以3-5倍的硅胶装柱，并将含有浸膏的硅胶上样进行柱层析。

6.根据权利要求2所述植物黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述的步骤（2）所述的梯度洗脱程序为：洗脱时，洗脱液流量为每秒一滴，每0.5-1.0 L洗脱液进行减压浓缩，当浓缩浸膏质量小于1 g，即更换梯度；其梯度依次是是氯仿和丙酮体积配比为9：1、8：2、7：3、6：4和5：5。

7.根据权利要求2所述植物黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述的步骤（3）所述的梯度洗脱程序为：洗脱时，洗脱液流量为每秒一滴，每0.5-1.0 L洗脱液进行减压浓缩，当浓缩浸膏质量小于1 g，即更换梯度；其梯度依次是是氯仿和丙酮体积配比为15：1、15：3、15：5、15：6和15：7.5。

8.根据权利要求2所述植物黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述的步骤（3）所述的高压液相色谱分离纯化是采用甲醇-水为流动相，甲醇与水的体积比为4：6~6：4，内径×柱长为20 ×250 mm， 填料粒径为5 μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为10~14 mL/min，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样180~220 μL，收集样品的色谱峰，多次累加后蒸干，得到蒸干物。

9.根据权利要求8所述植物黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述的步骤（3）所述的凝胶色谱分离纯化是首先将高压液相色谱分离纯化得到的蒸干物用纯甲醇溶解，再以甲醇为流动相，用凝胶柱层析分离，分离时按照接收液体积计算，接收第120-150 mL洗脱液，然后浓缩，即得到式（Ⅰ）所述的植物黄酮类化合物；所述的步骤（3）中凝胶色谱分离纯化使用的是Sephadex LH-20 凝胶柱。

10.权利要求1所述植物黄酮类化合物作为制备对抗烟草花叶病毒药物的应用。