[发明专利]一种抗烟草花叶病毒植物黄酮类化合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于植物化学技术领域，具体涉及一种来源于烟草植物的，尤其来源于烟草的黄酮类化合物及其制备方法与应用。

背景技术

黄酮(chromone)是一类自然界中广泛存在的生物活性物质，由于植物中黄酮成分结构类型多，立体化学复杂，具有多种生物活性，国内外对该领域的研究十分活跃；无论是天然存在的，还是人工合成得到的黄酮类化合物，都引起了化学家的广泛关注。

本发明涉及的烟草，产自云南省云龙县天登地区，拉丁名parasitica var.nicotianae，属于茄科烟草属，分布在云南省西部地区，作为一种地方晾晒烟，是烟草工业常用的烟叶原料。该烟草植物富含黄酮类化合物。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种结构新颖的植物黄酮类化合物；第二目的在于提供所述植物黄酮类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述植物黄酮类化合物在制备对抗烟草花叶病毒药物中的应用。

本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一目的是这样实现的，所述植物黄酮类化合物从烟草中分离得到，paranicflavone A，其分子式为C₂₀H₁₄O₅，其结构式如式(Ⅰ)所示：

式(Ⅰ)。

本发明第二目的是这样实现的，所述的植物黄酮类化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤(1)，浸膏提取：将植物样品粉碎到30～50目，以体积百分比浓度为65-75％丙酮水溶液，室温提取2～4次，每次6～10h，合并提取液，过滤，得滤液，减压浓缩得水液；

步骤(2)，萃取和硅胶柱层析分离：将步骤(1)得到的水液用乙酸乙酯萃取，分别得到乙酸乙酯层和水溶液层，乙酸乙酯层减压浓缩成浸膏，然后用200～300目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用氯仿-丙酮梯度洗脱，得到A-E五部分；

步骤(3)，高效液相色谱分离：步骤(1)中B部分再用体积比为15:1～2:1氯仿-丙酮进行梯度洗脱，得到B1-B6六部分；将B2部分结合高压液相色谱分离纯化及凝胶色谱分离纯化即得式(Ⅰ)所述的植物黄酮类化合物。

进一步，优选的是步骤(1)中丙酮水溶液的体积百分比浓度为70％。

进一步，优选的是步骤(1)中每次提取时丙酮水溶液的体积与植物样品质量比为8-12L：1Kg。

进一步，优选的是步骤(2)得到的浸膏在经硅胶柱层析前，用浸膏重量1.5～4倍量的95％甲醇溶解，然后用浸膏质量2-4倍的100目硅胶搅拌，至混合均匀，再以3-5倍的硅胶装柱，并将含有浸膏的硅胶上样进行柱层析。

进一步，优选的是步骤(2)所述的梯度洗脱程序为：洗脱时，洗脱液流量为每秒一滴，每0.5-1.0L洗脱液进行减压浓缩，当浓缩浸膏质量小于1g，即更换梯度；其梯度依次是是氯仿和丙酮体积配比为9：1、8：2、7：3、6：4和5：5。

进一步，优选的是步骤(3)所述的梯度洗脱程序为：洗脱时，洗脱液流量为每秒一滴，每0.5-1.0L洗脱液进行减压浓缩，当浓缩浸膏质量小于1g，即更换梯度；其梯度依次是是氯仿和丙酮体积配比为15：1、15：3、15：5、15：6和15：7.5。

进一步，优选的是步骤(3)所述的高压液相色谱分离纯化是采用甲醇-水为流动相，甲醇与水的体积比为4：6～6：4，内径×柱长为20×250mm，填料粒径为5μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为10～14mL/min，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样180～220μL，收集样品的色谱峰，多次累加后蒸干，得到蒸干物。

进一步，优选的是步骤(3)所述的凝胶色谱分离纯化是首先将高压液相色谱分离纯化得到的蒸干物用纯甲醇溶解，再以甲醇为流动相，用凝胶柱层析分离，分离时按照接收液体积计算，接收第120-150mL洗脱液，然后浓缩，即得到式(Ⅰ)所述的植物黄酮类化合物。

进一步，优选的是步骤(3)中凝胶色谱分离纯化使用的是Sephadex LH-20凝胶柱。

以上述方法制备的黄酮类化合物的结构是通过以下方法测定出来的：