[发明专利]一种原代B细胞急性淋系白血病细胞的体外培养方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种原代B细胞急性淋系白血病细胞的体外培养方法。本发明将原代B‑ALL细胞与OP9细胞共培养，可维持原代B‑ALL细胞的存活率和增殖，并极大程度上缓解B‑ALL细胞的分化和衰老。本发明所述培养方法培养的原代B‑ALL细胞可增殖，且细胞状态良好，充分体现了肿瘤细胞的异质性。本发明所述方法操作简单，方便、经济，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物领域，特别涉及一种原代B细胞急性淋系白血病细胞的体外培养方法。

背景技术

B细胞急性淋系白血病(B-ALL，B-cell acute lymphoblastic leukemia)，也称为前体B细胞(pre B-cell)急性淋巴细胞白血病，是来源于B细胞祖细胞的恶性肿瘤。B-ALL主要为儿童高发性癌症，在成人发病率下降。在B-ALL未成年患者中预后好，长期存活率(EFS，event-free survival)可达90％，但在B-ALL成人中却是预后差、低生存率。另外在成年B-ALL患者中，传统的化疗的效果差，死亡率约为60％。因此，针对B-ALL，需要研发新的有效治疗方法。

迄今为止，B-ALL相关研究主要依赖于B-ALL细胞系，而细胞系在长期传代培养的过程中，对高浓度血清的非人体环境中逐渐适应，并形成了一些区别于原代肿瘤细胞的基因突变和细胞特性(如高表达p53突变)。尽管病人来源的B-ALL样本细胞可以通过异种移植入免疫缺陷小鼠中扩大增殖后，进行体内实验，然而体内研究花费高、耗时长，特别是对于新型治疗方法或药物筛选实验，耗费的人力物力是不可预估的。

目前已发表了一些原代B-ALL细胞体外培养的相关报道，如利用人细胞因子SCF、IL-3、IL-7和FLT-3L等刺激培养，或利用正常人骨髓内皮细胞系(HBME，human bone marrowendothelial cells)或人骨髓基质细胞(MSC，human marrow stromal cell)等进行共培养，但培养成功率低，且结果重复性差。

综上所述，现有技术利用B-ALL细胞系进行肿瘤研究不能真实模拟肿瘤的异质性、无法满足随着药物使用而突变的肿瘤的治疗需求；而原代B-ALL细胞的体外培养仍处于不成熟阶段，大部分肿瘤细胞样本因无法适应体内外环境的转变而快速凋亡(2周内)，而可在成功体外长期培养的肿瘤细胞样本比率不高。因此，亟需开发稳定而有效的原代B-ALL体外培养方法，实现在病人原代肿瘤细胞进行直接、精确的实验和分析，促进B-ALL相关疾病机制研究和新型治疗手段研发进展。

发明内容

本发明旨在提供一种成熟、简便的原代B-ALL细胞的体外培养方法，为B-ALL的疾病机制研究、治疗药物的筛选及药效评估提供一个快速、经济、重复性高的体外模型。

本发明利用OP9细胞系，一种小鼠骨髓来源的胚胎间充质干细胞系，与B细胞急性淋系白血病病人来源的原代B-ALL细胞共培养，使原代B-ALL细胞可在体外增殖并长期存活。

本发明所述培养方法是一种有效、简便、利于推广的病人来源的原代B细胞急性淋系白血病(B-ALL，B-cell acute lymphoblastic leukemia)细胞的体外长期培养方法。本发明所述病人来源的原代B-ALL细胞的体外培养方法，可用于研究B-ALL相关的特殊基因突变、染色体重排、DNA或染色体甲基化的表观遗传变化、药物耐药性、细胞标志的表达和功能、免疫原性、细胞周期和凋亡机制、治疗药物敏感性等。同时还可用于探索B-ALL的疾病起始、B-ALL细胞分化等。

实验证实，B-ALL体外培养7天后，对照组仅B-ALL已基本没有存活或状态良好的B-ALL细胞，而OP9共培养组中，还有大量的状态良好的具有完整圆形形态的B-ALL细胞，且B-ALL细胞呈现增殖状态，成团聚集并粘附于OP9细胞表面。