[发明专利]一种提高AA-2G转化率的环糊精葡萄糖基转移酶突变体

权利要求书

1.一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体，其特征在于，相对于氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的环糊精葡萄糖基转移酶发生了一个或两个氨基酸位点的突变；所述突变与环糊精葡萄糖基转移酶产2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸的转化率相关。

2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述发生突变的氨基酸位点是第228位的赖氨酸或第367位的天冬氨酸。

3.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变是将第228位的赖氨酸突变为精氨酸，突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示的序列。

4.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变是将第367位的天冬氨酸突变成丝氨酸。

5.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变是将第228位的赖氨酸突变为精氨酸，同时将第367位的天冬氨酸突变成丝氨酸，得到的突变体命名为K228R/D367S。

6.表达权利要求1-5任一所述突变体的基因工程菌。

7.一种权利要求1所述突变体的制备方法，包括如下步骤：

(1)在Bacillus stearothermophilus NO2环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列的基础上确定突变位点；

(2)设计定点突变的突变引物，以携带环糊精葡萄糖基转移酶基因的载体为模板进行定点突变并构建含突变体的质粒载体；

(3)将突变体质粒转化进宿主细胞；挑选阳性克隆进行发酵培养，并纯化环糊精葡萄糖基转移酶突变体。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述质粒载体为pUC系列，pET系列，或pGEX中的任意一种。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为细菌或真菌细胞；所述的细菌为革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌。

10.权利要求1-5任一所述的突变体在AA-2G生产方面的应用。