[发明专利]目标区域测序文库构建方法

说明书

本发明提供一种构建目标区域测序文库的方法，包括：获取待测样本中的核酸，所述核酸由多个核酸片段组成；末端修复所述核酸片段，获得末端修复片段；加碱基A至所述末端修复片段的两端，获得粘性末端片段；连接接头于所述粘性末端片段的两端，获得接头连接片段；对所述接头连接片段进行第一扩增，获得第一扩增产物；利用试剂盒对所述第一扩增产物进行捕获，获得所述目标区域；以及对所述目标区域进行第二扩增，获得第二扩增产物，所述第二扩增产物即为所述目标区域测序文库；其中，所述试剂盒包含探针，所述探针能够特异性识别表1里的547个基因中的至少10个基因的基因区域。本发明还公开了一种测序方法、目标区域变异检测方法及其装置。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体的，本发明涉及一种构建目标区域测序文库的方法、一种测序方法、目标区域变异检测方法及装置。

背景技术

肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一，20世纪70年代以来，我国癌症发病及死亡率一直呈上升趋势，至90年代的20年间，癌症死亡率上升29.42％，年龄调整死亡率上升11.56％。2000年癌症发病人数约180-200万，死亡140-150万。恶性肿瘤发病率全国35岁至39岁年龄段为87.07/10万，40岁至44岁年龄段几乎翻番，达到154.53/10万；50岁以上人群发病占全部发病的80％以上，60岁以上癌症发病率超过1％，80岁达到高峰。全国肿瘤死亡率为180.54/10万，每年因癌症死亡病例达270万例。我国居民因癌症死亡的几率是13％[赫捷,陈万青.(2012).2012中国肿瘤登记年报.军事医学科学出版社:18-28.McBride,D.J.and A.K.Orpana,et al.(2010).Use of cancer-specific genomicrearrangements to quantify disease burden in plasma from patients with solidtumors.Genes Chromosomes Cancer 49(11):1062-1069.]。癌症不仅严重影响劳动人民的健康，而且成为医疗费用上涨的重要因素。我国每年耗费大量资金用于癌症病人的医疗费用，带来巨大的经济负担。

癌症的发生时一个渐进缓慢的过程，如能够对其做到早期发现，临床有效治疗，到术后复发监测进行全面控制，可有效的降低其发生率和死亡率，将有着巨大的经济效益和社会效益，寻找特异性的肿瘤标志物对早期筛查、术后监控等方面均有重要作用[KayabaH.Tumor markers:essential diagnostic tools for radiologists[J].NipponLgakuHoshasenGakkaiZasshi,2003,63(4):133-139]。

循环DNA是存在于血液、滑膜液等体液中的细胞外游离DNA，研究发现许多肿瘤患者循环DNA与正常人相比有很大差异，由于肿瘤细胞凋亡，癌症患者循环DNA中含有一定的肿瘤标志物。近年来肿瘤患者血液中循环游离DNA的基因检测诊断已成为研究热点，研究显示血液中循环肿瘤DNA有可能成为一种新的肿瘤早期诊断及预后判断的标志物。检测血液中循环游离DNA中的肿瘤标志物检测具有区别于传统组织肿瘤标志物检测方式，具有无创、随时监控和早期筛查等优势，并且对循环游离DNA的取样检测避免了当前分子诊断需要采集癌组织作为标本来源的困难，是一种很有潜力的肿瘤标志物。同时将血液肿瘤标志物与临床检验结合起来，可以辅助肿瘤的早期诊断和实时监控或者为肿瘤的早期诊断或监控提供重要线索，有可能能成为肿瘤的早期筛查和预后判断提供重要依据。

发明内容