[发明专利]一种快速测定食物中毒样品中的酵米面黄杆菌毒素A的方法

权利要求书

1.一种快速测定食物中毒样品中的酵米面黄杆菌毒素A的方法，其特征在于方法包括步骤如下：

(1)样品提取步骤；

(2)酵米面黄杆菌毒素A的分子离子峰、特征子离子峰及MAM参数的确定；

(3)样品定性定量检测。

2.如权利要求1所述的快速测定食物中毒样品中的酵米面黄杆菌毒素A的方法，其特征在于：所述样品提取具体步骤如下：

(1)不含油样品：

准确称取2.000g食物，加10ml纯水匀浆，用6mol/L HCL调至pH2～3，8000r/min离心10min，取上清液，加正己烷提取两次，每次10ml，合并正己烷，40℃旋转蒸发至干，用甲醇定容至1ml，待测；

(2)含油样品：

准确称取2.000g食物，加10ml 40g/L碳酸氢钠匀浆，8000r/min离心10min，取上清液，加石油醚10ml提取，弃去石油醚，用6mol/LHCL调至pH2～3，加正己烷提取两次，每次10ml，合并正己烷，40℃旋转蒸发至干，用甲醇定容至1ml，待测。

3.如权利要求1所述的快速测定食物中毒样品中的酵米面黄杆菌毒素A的方法，其特征在于：所述确定酵米面黄杆菌毒素A分子的离子峰、特征子离子峰及MAM参数具体的步骤如下：

(1)把酵米面黄杆菌毒素A的标准品，配置成1mg/kg的浓度，通过蠕动泵注入串联质谱仪，找到酵米面黄杆菌毒素A分子离子峰(母离子，M-1离子)为485.4；

(2)通过调节串联质谱仪的碰撞气能量CE和去簇电压DP撞击酵米面黄杆菌毒素A分子离子峰(母离子，M-1离子)485.4，找到三个有代表性特征子离子，分别为441.4、397.3、321.5；

(3)通过串联质谱仪把碰撞气能量CE和去簇电压DP调节到最佳状态，选择测定酵米面黄杆菌毒素A的离子对、碰撞电压和去簇电压详见下表；

4.如权利要求1所述的快速测定食物中毒样品中的酵米面黄杆菌毒素A的方法，其特征在于：所述样品检测具体步骤如下：

(1)对步骤2处理后的样品使用超高效液相色谱和在ESI负离子模式下用串联四极杆质谱进行定性定量分析；

①色谱条件为：Waters BEH HILIC 1.7μm 2.1×100mm色谱柱及同种填料不同柱形的色谱柱；进样量5～20μl；柱温为30℃；流动相A为水，其中含有0.1％甲酸：B为甲醇，流动相比率A:B＝30％:70％，等梯度洗脱3min，流速300μl/min；

②质谱条件为：离子化方式：电喷雾离子源负离子模式；检测方式：MRM；碰撞气：Midium；气帘气：25psi；雾化气：45psi；加热气：55psi；喷雾电压：-4500V；去溶剂温度：400℃；扫描时间:20ms；

(2)对步骤2处理后的样品进行定性测定：标准品及样品溶液按照上述UPLC/MS/MS测定条件分别进行测定，如果进行样品测定时，检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的3个二级特征离子均出现，且与标准样品的3个特征离子相一致，则可判断样品中存在酵米面黄杆菌毒素A；

(3)对步骤2处理后的样品进行定量测定：本方法中UPLC/MS/MS采用外标校准曲线法定量测定，为减少基质对定量的测定的影响，采用不含酵米面黄杆菌毒素A的样品洗脱液来配制标准系列溶液，绘制标准曲线，并且保证所测样品中酵米面黄杆菌毒素A的响应值均在仪器的线性范围内。