[发明专利]一种检测淀粉样多肽聚集及其聚集抑制剂评估的方法

权利要求书

1.一种检测淀粉样多肽聚集及其聚集抑制剂评估的方法，其特征在于具体步骤如下：

将淀粉样多肽充分溶解分散在六氟异丙醇中得到溶液A，对溶液A进行干燥，干燥后的淀粉样多肽使用去离子水进行溶解，配置成浓度为250-1000 μg/mL的淀粉样多肽水溶液，称为溶液B；

得到QCM共振频率基线后，取上述溶液B溶液通入石英晶体微天平传感器中，随着多肽分子在芯片表面的吸附集聚，QCM频率信号和能量耗散将发生改变，检测到的信号作为抑制剂组的阳性对照B；

将浓度为10-200μg/mL的聚集抑制剂的水溶液称为溶液C，在得到QCM共振频率基线后，将溶液C通入QCM传感器得到的QCM 频率和能量耗散信号作为聚集抑制剂评价的阴性对照C使用；

在得到QCM共振频率基线后，将待评价的淀粉样多肽水溶液和抑制剂水溶液混合得到混合溶液D，混合溶液D中淀粉样多肽的浓度与前述阳性对照——溶液B的浓度一致，抑制剂分子的浓度与阴性对照——溶液C的浓度一致；将混合液D所得到的QCM能量频率信号与阳性对照B及阴性对照C进行比较，QCM 频率信号下降的数值越大，证明在表面上集聚的多肽越多；如果：阴性对照组的频率变化>抑制剂组的频率变化>阳性对照组的频率变化，说明该抑制剂对于多肽集聚具有抑制效果。

2.如权利要求1所述的一种检测淀粉样多肽聚集及其聚集抑制剂评估的方法，其特征在于将淀粉样多肽充分溶解分散在六氟异丙醇中得到溶液A指：每1ml六氟异丙醇中加入1mg淀粉样多肽，晃动溶液A使多肽干粉能够充分溶解分散，得到浓度为1mg/mL 多肽溶液A。

3.如权利要求2所述的一种检测淀粉样多肽聚集及其聚集抑制剂评估的方法，其特征在于：晃动溶液A以使之充分溶解的时间为24h。

4.如权利要求1所述的一种检测淀粉样多肽聚集及其聚集抑制剂评估的方法，其特征在于所述得到QCM共振频率基线指：将去离子水通入QCM 传感器，待水进入传感器使QCM频率曲线达到稳定状态后即为基线状态。

5.对如权利要求1所述方法验证的方法，其特征在于：采用原子力显微镜检测芯片表面形貌验证，在表面进行完QCM试验后，将芯片干燥后，对抑制剂组和对照组芯片进行AFM形貌观测，验证QCM结果；如果AFM图中有大量多肽纤维出现，则证明多肽抑制效果差，反之，如果所得AFM图很少见到多肽的纤维，则证明多肽抑制剂作用很强。