[发明专利]体外软骨细胞的培养方法

权利要求书

1.一种体外软骨细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

获取软骨细胞样本；

将所述软骨细胞样本进行原代培养；

将原代培养所得的软骨细胞进行传代培养，并在待传代培养至软骨细胞汇合度达到70～80％时，更换新鲜培养基并加入莱菔硫烷对软骨细胞进行处理。

2.如权利要求1所述的体外软骨细胞培养方法，其特征在于，所述新鲜培养基中添加的莱菔硫烷为5μΜ～8μΜ。

3.如权利要求1或2所述的体外软骨细胞培养方法，其特征在于，所述传代培养过程中按照1:3的比例进行传代。

4.如权利要求1或2所述的体外软骨细胞培养方法，其特征在于，所述原代培养和传代培养过程中采用的培养基为DMEM/F12培养基，且该DMEM/F12培养基中还添加有DMEM/F12培养基质量分数10％的胎牛血清FBS、1％的双抗及1％的α-MEM非必需氨基酸。

5.如权利要求1或2所述的体外软骨细胞培养方法，其特征在于，将所述软骨细胞样本进行原代培养之后、以及将原代培养所得的软骨细胞进行传代培养之前，还包括将所述原代培养细胞用胰蛋白酶处理。

6.如权利要求1或2所述的体外软骨细胞培养方法，其特征在于，将所述软骨细胞样本进行原代培养过程中，培养至软骨细胞汇合度为80～90％。

7.如权利要求3所述的体外软骨细胞培养方法，其特征在于，所述莱菔硫烷对软骨细胞进行处理过程之后，还包括：

将软骨细胞继续培养至汇合度为80～90％时，收集软骨细胞的细胞体。

8.如权利要求7所述的体外软骨细胞培养方法，其特征在于，所述收集软骨细胞的细胞体步骤之后还包括：

检测所述细胞体中Col2a1和Col1a1的表达水平。

9.如权利要求8所述的体外软骨细胞培养方法，其特征在于，所述检测所述细胞体中Col2a1和Col1a1的表达水平包括：

用Trizol裂解所述细胞体，提取细胞体内的RNA；

分别采用实时荧光RT-PCR检测Col2a1和Col1a1基因的表达水平。

10.如权利要求8所述的体外软骨细胞培养方法，其特征在于，所述检测所述细胞体中Col2a1和Col1a1的表达水平包括：

将所述细胞体用多聚甲醛进行处理；

通过蛋白免疫荧光染色法检测多聚甲醛处理后的细胞体中Col2a1和Col1a1的含量。