[发明专利]一种高效快速的有核细胞提取试剂组合在审
申请号: | 201410785126.4 | 申请日: | 2014-12-16 |
公开(公告)号: | CN105754929A | 公开(公告)日: | 2016-07-13 |
发明(设计)人: | 张丽;王飞;黄国涛;张露亿;徐栋;夏育宏;曹卫 | 申请(专利权)人: | 西比曼生物科技(上海)有限公司;西比曼生物科技(无锡)有限公司 |
主分类号: | C12N5/071 | 分类号: | C12N5/071;C12N5/077;C12N5/078;C12N5/0789 |
代理公司: | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人: | 马莉华;崔佳佳 |
地址: | 200233 上海*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 高效 快速 细胞 提取 试剂 组合 | ||
1.一种有核细胞提取试剂组合或试剂盒,其特征在于,包括以下试剂(a)、(b)和(c):
(a)洗涤液;所述的洗涤液为水溶液,且所述的溶液包括:氯化钠、氯化钾、氯化镁、葡萄糖酸钠、醋酸钠;
(b)稀释液;所述的稀释液为培养基溶液,且所述的溶液包括:氯化钙、氯化钾、氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钠、氨基酸,和任选的葡萄糖和/或维生素;
(c)酶制剂;所述的酶制剂包括:培养基、胶原酶;
优选地,所述的培养基选自下组:DMEM、MEM、1640、F12、IMDM,或其组合。
2.如权利要求1所述的试剂组合或试剂盒,其特征在于:
所述的试剂(a)的PH值为6.0~7.5;
所述的试剂(b)的PH值为6.5~7.5;
所述的试剂(c)的PH值为6.5~8.5。
3.如权利要求1所述的试剂组合或试剂盒,其特征在于,在所述的试剂(c)中,所述的胶原酶浓度为0.1-0.5wt%,优选为0.1-0.3wt%。
4.如权利要求1所述的试剂组合或试剂盒,其特征在于,在所述的试剂(c)中,所述的胶原酶选自下组:胶原酶I、胶原酶II。
5.如权利要求1所述的试剂组合或试剂盒,其特征在于,在所述的组分(b)中:
所述的氨基酸选自下组:L-亮氨酸、L-脯氨酸、L-异亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-醋酸赖氨酸、L-苏氨酸、L-蛋氨酸、L-色氨酸、L-组氨酸、N-乙酰-L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、L-丙氨酸、L-丝氨酸、甘氨酸、L-精氨酸、L-天门冬氨酸、L-盐酸半胱氨酸、L-谷氨酸,或其组合;
所述的维生素选自下组:维生素B5、叶酸、维生素B6、维生素B2、维生素B1、维生素B3、维生素C,或其组合。
6.如权利要求1所述的试剂组合或试剂盒,其特征在于,在所述的试剂(a)中:
所述氯化钠的浓度为4~6g/L,较佳地为5~5.5g/L;更佳地为5.26g/L;或所述氯化钠的浓度为1.2~1.7g/L,较佳地为1.4~1.6g/L;和/或
所述氯化钾的浓度为0.2~0.5g/L,较佳地为0.3~0.4g/L;更佳地为0.37g/L;或所述氯化钾的浓度为0.02~0.05g/L,较佳地为0.03~0.04g/L;和/或
所述氯化镁的浓度为0.1~0.5g/L,较佳地为0.2~0.4g/L;更佳地为0.3g/L;或所述氯化镁的浓度为0.01~0.05g/L,较佳地为0.02~0.04g/L;和/或
所述葡萄糖酸钠的浓度为1~6g/L,较佳地为3~5.5g/L;更佳地为5.02g/L;或所述葡萄糖酸钠的浓度为0.1~0.6g/L,较佳地为0.15~0.55g/L;和/或
所述醋酸钠的浓度为1~5g/L,较佳地为2~4g/L;更佳地为3.68g/L;或所述醋酸钠浓度为0.1~0.5g/L,较佳地为0.2~0.4g/L;和/或
在所述的试剂(b)中:
所述氯化钙的浓度为100~300mg/L,较佳地为150~250mg/L;更佳地为200mg/L;和/或
所述葡萄糖的浓度为500~1500mg/L,较佳地为800~1200mg/L;更佳地为1000mg/L;和/或
所述氨基酸的浓度为500~1500mg/L,较佳地为800~1200mg/L;更佳地为1000mg/L;和/或
所述氯化钾的浓度为300~500mg/L,较佳地为350~450mg/L;更佳地为400mg/L;和/或
所述氯化钠的浓度为6000~6500mg/L,较佳地为6200~6500mg/L;更佳地为6400mg/L;和/或
所述硫酸镁的浓度为80~100mg/L,较佳地为90~100mg/L;更佳地为97mg/L;和/或
所述磷酸二氢钠的浓度为90~120mg/L,较佳地为100~110mg/L;更佳地为108mg/L;和/或
所述维生素的浓度为10~30mg/L,较佳地为15~25mg/L;更佳地为20mg/L;和/或
在所述的试剂(c)中:
所述胶原酶的浓度为0.1-0.5wt%。
7.一种有核细胞提取方法,其特征在于,用如权利要求1所述的试剂组合或试剂盒进行提取。
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