[发明专利]一种高效快速的有核细胞提取试剂组合

说明书

技术领域

本发明涉及干细胞学领域，具体地，本发明涉及一种有核细胞的提取试剂组合物。

背景技术

目前脂肪组织因其在能量调控、炎症反应和免疫应答方面的作用，已被认为是一个内分泌器官。此外，脂肪组织还是具有多向分化潜能的多功能细胞的来源之一，而这种多功能细胞就存在于脂肪组织的有核细胞中。

SVF(StromalVascularFraction，即血管基质成分)，或脂肪来源基质血管成分是干细胞辅助脂肪移植中最重要的组分。SVF中含有丰富的间充质细胞，可分化为多种谱系的细胞，是再生医学、组织工程等最理想的种子细胞。SVF是一组混杂的细胞群，其含有血管内皮细胞、脂肪祖细胞、成纤维细胞、周细胞、基质细胞、ASCs，以及来自血液的白细胞、红细胞、造血干细胞和内皮祖细胞。也就是说，SVF中既有成熟细胞，也有未成熟细胞。

在脂肪组织中，SVF细胞主要位于脂肪组织间质之中，部分SVF细胞靠近毛细血管，但很少附着于毛细血管。一些SVF细胞还能形成围绕成熟脂肪细胞的网状结构。SVF在促进新生血管化方面发挥功效，具有向内皮细胞表型分化并且有在体内参与血管形成的潜能。

正因为SVF含有丰富的，可塑性极强的脂肪组织来源的间充质干细胞，因此，如何高效率地提取SVF是本领域研究的重要课题。现有技术中，胶原酶一般现用现配，操作繁琐。而且，该方法的提取效率不如人意，且胶原酶存在无法保存，易变质的问题，无法制成试剂或试剂盒，阻碍了其应用。

因此，本领域尚缺乏一种易于保存，能够高效率地提取有核细胞的试剂，以及高效率地提取SVF等有核细胞的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种易于保存，能够高效率地提取有核细胞的试剂，以及高效率地提取有核细胞的方法。

本发明的第一方面，提供了一种有核细胞提取试剂组合或试剂盒，所述的试剂组合或试剂盒包括以下试剂(a)、(b)和(c)：

(a)洗涤液；所述的洗涤液为水溶液，且所述的溶液包括：氯化钠、氯化钾、氯化镁、葡萄糖酸钠、醋酸钠；

(b)稀释液；所述的稀释液为培养基溶液，且所述的溶液包括：氯化钙、氯化钾、氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钠、氨基酸，和任选的葡萄糖和/或维生素；

(c)酶制剂；所述的酶制剂包括：培养基、胶原酶；

优选地，所述的培养基选自下组：DMEM、MEM、1640、F12、IMDM，或其组合。

在另一优选例中，所述的试剂(a)为预配制的水溶液。

在另一优选例中，所述的试剂(b)为预配制的水溶液。

在另一优选例中，所述的试剂(c)为胶原酶的培养基溶液，较佳地，所述的试剂(c)为红色透明溶液。

在另一优选例中，所述的试剂(a)的体积为5-50ml。

在另一优选例中，所述的试剂(b)的体积为5-50ml。

在另一优选例中，所述的试剂(c)的体积为5-50ml。

在另一优选例中，所述的试剂(c)中的胶原酶和培养基是分开存放的，在使用时将二者进行混合。

在另一优选例中，所述的有核细胞为脂肪组织有核细胞。

在另一优选例中，所述的有核细胞为基质血管成分。

在另一优选例中，所述的试剂组合或试剂盒可在冻存条件下保存6个月，较佳地可在冻存条件下保存9个月，更佳地可在冻存条件下保存12个月。

在另一优选例中，所述的冻存条件指环境温度为0℃以下，优选为-15℃到-20℃。

在另一优选例中，所述的试剂组合或试剂盒用于从选自下组的组织中提取有核细胞成分：贴壁细胞组织，优选为脂肪组织，脐带组织，胎盘组织。

在另一优选例中，所述的试剂盒用于提取脐周脂肪组织基质血管成分。

在另一优选例中，所述的试剂(a)的PH值为6.0～7.5；

所述的试剂(b)的PH值为6.5～7.5；

所述的试剂(c)的PH值为6.5～8.5。

在另一优选例中，在所述的试剂(c)中，所述的胶原酶浓度为0.1-0.5wt％，优选为0.1-0.3wt％。

在另一优选例中，在所述的试剂(c)中，所述的胶原酶选自下组：胶原酶I、胶原酶II。

在另一优选例中，所述的胶原酶酶活为>0.3U/ml，较佳地为0.2-0.6U/ml。

在另一优选例中，在所述的试剂(c)中，所述的胶原酶酶活与该胶原酶的出厂酶活相当。

在另一优选例中，所述的胶原酶为胶原酶II。