[发明专利]一种毛竹叶中四种黄酮碳苷提取和纯化工艺

权利要求书

1.毛竹叶中四种黄酮碳苷提取和纯化工艺，所述的四种黄酮碳苷为荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷，其特征在于，包括如下步骤：

(1)准确称取毛竹叶粉末，加入乙醇水溶液中进行热回流提取，重复提取4次，过滤并将滤液合并得提取液；所述热回流提取的工艺为：70％～80％的乙醇，料液比为1∶15～1∶25，60～80℃恒温水浴提取1～3h；

(2)采用减压蒸馏法除去提取液中的有机溶剂，加入与提取液等体积的石油醚萃取，除去色素和脂溶性成分，重复萃取三次，得到毛竹叶黄酮粗提物，石油醚回收，循环使用；

(3)将毛竹叶黄酮粗提物经大孔树脂进行纯化处理：大孔树脂进行预处理，将毛竹叶黄酮粗提物上大孔树脂柱，湿法装柱，加入10mg·mL^-1竹叶黄酮粗提液，控制流速3BV·h^-1，大孔树脂与样品上样量比为5∶1，收集样品流出液，流出液重复上柱3次后，用15％乙醇溶液以4BV·h^-1的流速初步洗脱除杂，浓缩洗脱液，然后用60％的乙醇溶液以4BV·h^-1流速洗脱，最后收集60％乙醇洗脱液，浓缩并冷冻干燥得纯化后毛竹叶黄酮干粉；

(4)经聚酰胺树脂再次进行纯化处理：将上述大孔树脂纯化后的竹叶黄酮粉末，溶解后，将聚酰胺树脂湿法装柱于2cm×35cm层析柱中，装柱高度为12.5cm，加入10mg·mL^-1上述竹叶黄酮干粉配制的溶液，控制3BV·h^-1流速过柱，收集流出液，重复上柱3次，再用蒸馏水洗脱，收集洗脱液，浓缩，接着用等体积40％乙醇溶液洗脱，最后收集40％乙醇洗脱液，浓缩并冷冻干燥得纯化后的竹叶黄酮干粉。

2.如权利要求1所述的毛竹叶中四种黄酮碳苷提取和纯化工艺，其特征在于，所述热回流提取的工艺为：75％乙醇、料液比1∶20、70℃下恒温水浴提取2h。

3.如权利要求1或2所述的毛竹叶中四种黄酮碳苷提取和纯化工艺，其特征在于，所述的大孔树脂为ADS-17、DM130或D101。

4.如权利要求3所述的毛竹叶中四种黄酮碳苷提取和纯化工艺，其特征在于，所述的大孔树脂为D101。

5.如权利要求1或2所述的毛竹叶中四种黄酮碳苷提取和纯化工艺，其特征在于，所述聚酰胺树脂的粒径为0.15～0.25mm。

6.如权利要求1或2所述的毛竹叶中四种黄酮碳苷提取和纯化工艺，其特征在于，在经大孔树脂或聚酰胺树脂纯化处理前，对大孔树脂或聚酰胺树脂进行预处理，具体如下：

用无水乙醇洗去细小树脂及杂质，然后浸泡12h，使大孔树脂或聚酰胺树脂充分溶胀，湿法装柱，用无水乙醇洗至洗出液无白色浑浊为止，再用蒸馏水冲洗至乙醇浓度为零，接着转入酸碱处理，先用3BV的5％NaOH溶液3BV·h^-1的流速通过树脂层，然后蒸馏水以相同的速度通过洗至pH呈中性；再用3BV 5％HCl溶液以3BV·h^-1流速通过树脂层，蒸馏水继续以同样流速洗脱至pH呈中性，最后大孔树脂或聚酰胺树脂置于无水乙醇中保存待用，临用前使用蒸馏水洗至乙醇浓度为零，即可上样。