[发明专利]基于滚环扩增技术的检测左旋色氨酸的方法在审
| 申请号： | 201410789100.7 | 申请日： | 2014-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN104450926A | 公开（公告）日： | 2015-03-25 |
| 发明（设计）人： | 赵国杰;关一夫 | 申请（专利权）人： | 中国医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 沈阳智龙专利事务所(普通合伙) 21115 | 代理人： | 宋铁军 |
| 地址： | 110122 辽宁省沈阳市沈阳*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 扩增 技术 检测 色氨酸 方法 | ||
1.一种基于滚环扩增技术的检测左旋色氨酸的方法，其特征在于包括下述步骤：待检测的左旋色氨酸与色氨酸阻遏蛋白结合，结合了左旋色氨酸的色氨酸阻遏蛋白通过识别并结合由环形单链模板DNA与线性单链引物DNA形成的双链上的特异性识别序列，进而抑制DNA聚合酶对单链引物DNA的延伸和扩增，滚环扩增反应的抑制程度与左旋色氨酸的浓度成正比，通过制备左旋色氨酸浓度与滚环扩增抑制率的标准曲线，检测待测样品对滚环扩增的抑制率，从而确定出待测样品中的左旋色氨酸含量。
2.按照权利要求1所述的基于滚环扩增技术的检测左旋色氨酸的方法，其特征在于：所述的待检测的左旋色氨酸是配制的左旋色氨酸溶液，或是各种提取或制备的生物样本。
3.按照权利要求1所述的基于滚环扩增技术的检测左旋色氨酸的方法，其特征在于：所述的色氨酸阻遏蛋白是细菌中调控色氨酸操纵子表达的阻遏蛋白trpR，该蛋白能够特异性地结合左旋色氨酸，并发生构象变化，提高了结合色氨酸操纵子识别序列的亲和力。
4.按照权利要求1所述的基于滚环扩增技术的检测左旋色氨酸的方法，其特征在于：所述的环形单链模板DNA，是作为扩增模板用于滚环扩增的单链DNA，并含有色氨酸阻遏蛋白的识别序列。
5.按照权利要求1所述的基于滚环扩增技术的检测左旋色氨酸的方法，其特征在于：所述的线性单链引物DNA，是作为扩增引物用于滚环扩增的线性单链DNA，并含有色氨酸阻遏蛋白的识别序列，该线性单链引物DNA序列与环形单链模板DNA的序列碱基具有序列互补性。
6.按照权利要求1所述的基于滚环扩增技术的检测左旋色氨酸的方法，其特征在于：所述的DNA聚合酶是用于滚环扩增的DNA聚合酶，包括但不限于phi29 DNA聚合酶。
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