[发明专利]一种金针菇多糖的分离纯化方法

权利要求书

1.一种金针菇多糖的分离纯化方法，其特征在于：该方法采用采用DEAE Cellulose-52离子交换柱层析法对金针菇多糖进行分离纯化，主要包括DEAE填充料处理、装柱、上样、洗涤、收集、透析冻干等步骤，

经过DEAE Cellulose-52分离得到的金针菇组分，通过葡聚糖凝胶Sephadex G-100进行进一步的分离纯化，

主要包括：Sephadex G-100预处理、装柱和平衡、金针菇多糖分级纯化。

2.根据权利要求1所述的一种金针菇多糖的分离纯化方法，其特征在于：具体步骤如下：

步骤一、DEAE Cellulose-52预处理

称取DEAE Cellulose-52离子交换填料100g，用蒸馏水并浸泡使其充分吸水溶胀，并除去上层漂浮的细小颗粒，

将充分溶胀后的DEAE纤维素胶体用布氏漏斗抽干，然后用0.5mol/LNaOH溶液浸泡3小时，抽干，用去离子水漂洗至中性，再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡3小时，抽干，用去丽水漂洗至中性；

步骤二、装柱

将上述处理过得DEAE-52填料用去离子水悬浮搅匀，超声除去悬液中的气泡，然后沿壁缓慢加入柱高30cm，内径2.6cm的玻璃柱内，静止使胶体沉淀，用3-5倍柱体积的去离子水洗涤，是层析柱达到离子平衡状态；

步骤三、多糖的初步分离纯化

金针菇多糖溶于蒸馏水，沿壁加入DEAE Cellulose-52离子交换柱，然后依次用蒸馏水、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的NaCI水溶液洗脱，恒流泵控制流速为1mL/min，自动分布收集器收集洗脱液，苯酚-硫酸法追踪检测收集液中多糖含量，绘制洗脱曲线，

选择最佳棘手风分段收集样品，合并收集液后减压浓缩，透析，东汉后得到金针菇多糖的DEAE Cellulose-52分离组分；Sephadex G-100凝胶色谱分离纯化

步骤四、Sephadex G-100的预处理

称取一定量的葡聚糖凝胶Sephadex G-100约20倍凝胶量的蒸馏水，置室温下12小时进行溶胀，然后用倾斜发除去表面悬浮的小颗粒；

步骤五、装柱和平衡；

步骤六、金针菇多糖分级纯化

将经过DEAE柱分离得到的多糖组分分别配制5mg/mL的水溶液10ml，加入Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱，去离子水洗脱，自动收集仪收集，用苯酚硫酸法哎波长为490nm检测各管的吸光度值，绘制洗脱曲线，选择最佳吸收峰分段收集样品，减压浓缩，透析，冻干。