[发明专利]一种金针菇多糖的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种金针菇多糖的分离纯化方法，属于医药生物检测技术领域。

背景技术

金针菇属真菌门，是目前国内消费量最大的食用菌类之一，其不仅含有丰富的营养物质，而且还含有多种生物活性物质，据报道，金针菇能够增强儿童生长和智力发育，是一种药食两用菌类。其不仅营养成分齐全，还含有丰富的粗蛋白、碳水化合物、粗脂肪、粗纤维、烟酸、矿质元素如铁、钙、磷、钠灯，还含有金针菇多糖、免疫调节蛋白、黄酮类、萜类等多种生物活性成分。

     金针菇多糖（FVP）是一个以葡聚糖为主，由数个多糖组分构成的混合多糖，采用不同的提取分离方法得到的金针菇多糖，其分子量、单糖组成等分子结构特征有所不同，具有的生物功能活性也各有差异。

金针菇多糖提取后得到的提取液中含有蛋白类、色素、小分子可溶性物质等，因此需要进一步纯化处理，多糖的分离纯化主要包括去蛋白、去色素等小分子物质、以及不同特性多糖的进一步分离。

发明内容

本发明的目的是：提供一种金针菇多糖的分离纯化方法，提纯速度快，纯化速度高，以克服现有技术的不足。

本发明的技术方案

一种金针菇多糖的分离纯化方法，该方法采用采用DEAE Cellulose-52离子交换柱层析法对金针菇多糖进行分离纯化，主要包括DEAE填充料处理、装柱、上样、洗涤、收集、透析冻干等步骤。经过DEAE Cellulose-52分离得到的金针菇组分，通过葡聚糖凝胶Sephadex G-100进行进一步的分离纯化。主要包括：Sephadex G-100预处理、装柱和平衡、金针菇多糖分级纯化。

前述的一种金针菇多糖的分离纯化方法中，具体步骤如下：

步骤一、DEAE Cellulose-52预处理

称取DEAE Cellulose-52离子交换填料100g，用蒸馏水并浸泡使其充分吸水溶胀，并除去上层漂浮的细小颗粒。将充分溶胀后的DEAE纤维素胶体用布氏漏斗抽干，然后用0.5mol/LNaOH溶液浸泡3小时，抽干，用去离子水漂洗至中性，再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡3小时，抽干，用去丽水漂洗至中性；

步骤二、装柱

将上述处理过得DEAE-52填料用去离子水悬浮搅匀，超声除去悬液中的气泡，然后沿壁缓慢加入柱高30cm，内径2.6cm的玻璃柱内，静止使胶体沉淀，用3-5倍柱体积的去离子水洗涤，是层析柱达到离子平衡状态；

步骤三、多糖的初步分离纯化

金针菇多糖溶于蒸馏水，沿壁加入DEAE Cellulose-52离子交换柱，然后依次用蒸馏水、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的NaCI水溶液洗脱，恒流泵控制流速为1mL/min，自动分布收集器收集洗脱液，苯酚-硫酸法追踪检测收集液中多糖含量，绘制洗脱曲线。选择最佳棘手风分段收集样品，合并收集液后减压浓缩，透析，东汉后得到金针菇多糖的DEAE Cellulose-52分离组分；Sephadex G-100凝胶色谱分离纯化

步骤四、Sephadex G-100的预处理

称取一定量的葡聚糖凝胶Sephadex G-100约20倍凝胶量的蒸馏水，置室温下12小时进行溶胀，然后用倾斜发除去表面悬浮的小颗粒；

步骤五、装柱和平衡；

步骤六、金针菇多糖分级纯化

将经过DEAE柱分离得到的多糖组分分别配制5mg/mL的水溶液10ml，加入Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱，去离子水洗脱，自动收集仪收集，用苯酚硫酸法哎波长为490nm检测各管的吸光度值，绘制洗脱曲线，选择最佳吸收峰分段收集样品，减压浓缩，透析，冻干。

通过采用上述技术方案，与现有技术相比，本发明采用上述分离纯化的方法，不但操作简单，成本低廉，通过分离速度快，纯化的浓度高，适合批量化推广。

具体实施方式

下面本发明进一步的详细说明，但不作为对本发明的任何限制。

本发明的实施例：

一种金针菇多糖的分离纯化方法，该方法采用采用DEAE Cellulose-52离子交换柱层析法对金针菇多糖进行分离纯化，主要包括DEAE填充料处理、装柱、上样、洗涤、收集、透析冻干等步骤。经过DEAE Cellulose-52分离得到的金针菇组分，通过葡聚糖凝胶Sephadex G-100进行进一步的分离纯化。主要包括：Sephadex G-100预处理、装柱和平衡、金针菇多糖分级纯化。

具体步骤如下：