[发明专利]一种三代虫纯种人工感染系统的建立方法

权利要求书

1.一种三代虫纯种人工感染系统的建立方法，其特征在于：所述三代虫纯种人工感染系统的建立方法包括以下步骤：

1）健康无虫金鱼的获取：

1.1）将购买的金鱼暂养在盛有曝气自来水的水族箱中5-8天；

1.2）将经过步骤1.1）后的金鱼用100 mg/L的福尔马林溶液浸泡12 h，连续浸泡3次，每次间隔为2天；

1.3）浸泡结束后，将金鱼在曝气自来水中继续养殖，所述养殖时间不低于1周；

1.4）随机选取多尾金鱼，用50 mg/L的MS-222溶液麻醉后，在体视显微镜下观察鱼类的鳃、体表以及鳍条，确认无三代虫，得到健康无虫金鱼；

2）三代虫的人工感染：

2.1）从已经感染三代虫的金鱼尾鳍上选取1条三代虫；

2.2）将步骤2.1）所选取的三代虫置于经步骤1.4）麻醉后的健康无虫金鱼的尾鳍上；

2.3）待三代虫附着鳍条之后，将该金鱼养殖在一个隔离的且盛有曝气自来水的玻璃缸中；

2.4）养殖时间不低于12 h后，将步骤2.3）中金鱼再次用50 mg/L的MS-222溶液麻醉，置于体视显微镜下观察金鱼的鳍条是否有三代虫，若有，则进行步骤2.5）；若无，则返回执行步骤2.1）至步骤2.4）直至三代虫感染成功后进行步骤2.5）；

2.5）将感染成功后的金鱼与步骤1.4）中数量相同的健康金鱼混养，一周后，从混养的金鱼中随机选取一尾，选取其尾鳍上三代虫进行形态学鉴定以及分子鉴定，若经形态学鉴定以及分子鉴定后确认均是同一种三代虫，则将感染三代虫的金鱼与健康无虫金鱼按照1:4的比例混养，以得到更多的感染同一种三代虫的金鱼；若经形态学鉴定以及分子鉴定后确认不是同一种三代虫，则舍弃已感染三代虫的所有金鱼。

2.根据权利要求1所述的三代虫纯种人工感染系统的建立方法，其特征在于：所述步骤2）之后还包括：

3）三代虫人工感染后维持：

将感染三代虫的金鱼养于盛有曝气自来水的水族箱中，控制水温在20 ℃±1 ℃；保持水族箱中的水质清新，每天投喂1%鱼体重的商业颗粒饲料，定期投放定量的健康无虫金鱼。

3.根据权利要求1或2所述的三代虫纯种感染系统的建立方法，其特征在于：所述步骤2.5）中形态学鉴定的具体实现方式是：

加一滴清水到载玻片上，从鱼体上剥离一个完整的三代虫体置于水滴中，轻轻地盖上盖玻片，用滤纸在盖玻片边缘缓慢吸水，直到清水基本吸干为止；加上一滴APG溶液到盖玻片边缘，直到浸满盖玻片与载玻片之间的空隙；处理好的装片置于显微成像系统显微镜下观察拍照并测量虫体的分类学特征，并依据形态学特征和测量值与已公开的三代虫物种进行比较，进行种类鉴定。