[发明专利]穿心莲内酯的工业化制备色谱分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然产物提取领域，特别是涉及一种穿心莲内酯的工业化制备色谱分离纯化方法。

背景技术

穿心莲为爵床科穿心莲属植物，在亚洲几个世纪以前就用于治疗胃肠道和呼吸道感染、发热、疱疹、咽喉痛和各种细菌性感染。在中医里，穿心莲是一种治疗感冒的重要草药，它用于退热、驱毒，且价格低廉。

由于穿心莲内酯是穿心莲的主要有效成分，与茎、果相比，穿心莲叶中含穿心莲内酯最高；穿心莲内酯为酯类结构，在水溶液中易水解、开环、异构化，故影响药物稳定性。在对穿心莲内酯的稳定性研究中发现，在不同温度、不同pH值环境、不同的生物样品及不同有机溶剂中，穿心莲内酯稳定性都有较明显的差异。温度越低，穿心莲内酯的稳定性越好；在碱性条件下不稳定，且随着碱性强度的增加，其不稳定性增强；其在酸性条件下较稳定，但并非酸性越强，稳定性就越好；其最稳定的pH值为3～5。目前已经发现穿心莲内酯具有以下药理作用：抗菌消炎、解热作用；抗癌和免疫调节作用；病毒和免疫增强作用；心血管作用；保护肝脏。

有关穿心莲内酯提取分离的方法报道较多，有水提醇沉法、碱提乙醇重结晶法、水提大孔吸附树脂洗脱法等。专利号为201310096203.0的中国专利“穿心莲内酯及其制备方法”描述了一种重结晶制备穿心莲内酯的方法，该方法前处理步骤较为繁琐，需使用大量乙醇，且所得纯度不高。专利号为201310577892.7的中国专利“高品质穿心莲内酯组分的制备方法”描述了用反相色谱和亲水色谱结合进行少量高品质穿心莲内酯的提取方法，该方法相较于前一篇专利，在分离方法上已有了较大提高，但仍存在分离时间较长，产品分离量有限，且难以实时监测分离进度的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对目前穿心莲粗品精制过程中所存在的工艺繁杂，纯度不高，分离时间较长，产品分离量有限，且难以实时监测分离进度等问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种采用工业化制备色谱分离系统一步在线分离制备高纯度穿心莲内酯的新方法。本发明的技术方案如下：          一种穿心莲内酯的工业化制备色谱分离纯化方法，包括以下步骤：

（1）将穿心莲叶粉碎后溶解于溶剂中，在辅助作用下对原料浸提，固液分离后得到提取液；

（2）将上述提取液用干燥方法除去液体，过滤获得穿心莲内酯粗品；

（3）将穿心莲内酯粗品配置成溶液，过滤除去不溶物，获得穿心莲内酯溶液；

（4）将上述穿心莲内酯溶液泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，经两次梯度洗脱，用检测波长为254mm的紫外光度检测器，收集保留时间在15—20min的馏出液；

其中：

步骤（4）中所述动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱尺寸为 50*250mm,填料为10—50μm反相球形硅胶，流动相为有机溶剂的水溶液，浓度为10—90wt%。

进一步地，步骤（4）中所述流动相为乙醇和水，第一次梯度范围为30:70—80:20，流速为100ml/min,洗脱时间为30min,第二次梯度范围为90:10，洗脱时间为20min。

进一步地，步骤（4）中所述流动相为甲醇和水，第一次梯度范围为40:60—20:80，流速为120ml/min洗脱时间为50min，第二次梯度范围为90:10，洗脱时间为10min。

进一步地，步骤（4）中所述流动相为乙腈和水，第一次梯度范围为20:80—30:70，流速为80ml/min,洗脱时间为30min，第二次梯度范围为50:50，洗脱时间为20min。

进一步地，步骤（4）中所述反相球形硅胶为反相正十八烷基硅胶。

进一步地，步骤（4）中所述反相正十八烷基硅胶粒径为10μm或22μm。

进一步地，步骤（1）中所述溶剂为水或有机溶剂或水和有机溶剂的混合物。

 进一步地，步骤（1）中所述辅助作用为加热，采用微波或超声波加热。

进一步地，步骤（2）中所述干燥方法为喷雾或旋蒸。

本发明的有益效果是直接采用粗品提取后的穿心莲提取液来制备穿心莲内酯，无需大量复杂繁琐的前处理过程，所用溶剂廉价、安全，分离纯化过程一步完成，且可在线实时监测，大大提高了安全性，节约了原料和时间成本，适用于大规模工业化生产。高效液相色谱最终测定显示，穿心莲内酯纯度大于97%，总杂小于3%。

附图说明

图1是原始穿心莲内酯粗品的高效液相色谱测定图谱。