[发明专利]肌酐衍生物、肌酐免疫原及其特异性抗体与肌酐检测试剂盒

权利要求书

1.一种肌酐衍生物，其特征在于，具有式(Ⅰ)所示的结构式：

其中，R为连接基团-(CH₂)_n-COO-，n为1至20之间的整数。

2.一种肌酐免疫原，其特征在于，具有式(Ⅱ)所示的结构式：

其中，R为连接基团-(CH₂)_n-COO-，n是1至20之间的整数，载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽；优选所述R为-CH₂-COO-，所述载体为血清蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白。

3.一种抗肌酐特异性抗体，由免疫原免疫动物后生产得到，其特征在于，所述抗肌酐特异性抗体由权利要求2所述的肌酐免疫原免疫动物后得到。

4.根据权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述抗体为完整的蛋白分子或具有与肌酐特异性结合的能力的多肽片段。

5.根据权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。

6.根据权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述抗体由所述肌酐免疫原免疫兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马后得到。

7.一种肌酐免疫原的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

制备权利要求1所述的肌酐衍生物；以及

将所述肌酐衍生物与载体连接，得到所述肌酐免疫原；

其中，所述载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽；制备所述的肌酐衍生物的步骤包括：

步骤S1，将肌酐与卤代-(CH₂)_n-COO-叔丁酯在二甲基甲酰胺环境下进行取代反应，得到2-(CH₂)_n-COO-叔丁酯肌酐；以及

步骤S2，将所述2-(CH₂)_n-COO-叔丁酯肌酐溶于强酸溶液中得到反应液，对所述反应液在45～55℃下搅拌1.5～2.5h，得到所述肌酐衍生物。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括以下步骤：

步骤S11，将肌酐与卤代-(CH₂)_n-COO-叔丁酯溶于二甲基甲酰胺中，得到混合溶液；其中，所述肌酐与卤代-(CH₂)_n-COO-叔丁酯的摩尔比为1～1.2:1；优选在得到所述混合溶液之后，还包括对所述混合溶液进行加热至恒温的步骤，更优选所述加热至恒温的温度为80～90℃，所述恒温的时间大于等于24h；

步骤S12，向所述混合溶液中加入丙烯酸乙酯，得到反应混合物，并对所述反应混合物在0～4℃的低温下进行搅拌，得到固液混合物；以及

步骤S13，对所述固液混合物依次进行过滤、洗涤纯化和真空干燥处理，得到所述2-(CH₂)_n-COO-叔丁酯肌酐。

9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，当n＝1时，所述肌酐衍生物的制备步骤如下：

10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述载体与所述肌酐衍生物的连接步骤包括：

步骤S21，制备载体溶液和肌酐衍生物溶液；优选所述载体为血清蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白；

步骤S22，将所述肌酐衍生物溶液滴加至所述载体溶液中，得到滴加混合液；

步骤S23，对所述滴加混合液在2～8℃下搅拌过夜，得到所述肌酐免疫原粗品；以及

步骤S24，对所述肌酐免疫原粗品进行纯化，得到所述肌酐免疫原；优选采用透析的方式进行纯化。

11.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤S21中，

所述制备载体溶液的步骤包括将载体溶解于0.18～0.25M，pH在8.3～8.8的磷酸缓冲液中，得到所述载体溶液；以及

所述制备肌酐衍生物溶液的步骤包括将所述肌酐衍生物与1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺和N-羟基硫代琥珀酰亚胺置于二甲基甲酰胺、乙醇以及8～12mM，pH 4.8～5.2的磷酸钾缓冲液中进行室温搅拌，得到所述肌酐衍生物溶液；

其中，所述载体与所述肌酐衍生物的质量比为1～1.2:1。

12.一种肌酐检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求1所述的肌酐衍生物和/或权利要求3至6中任一项所述的抗体。