[发明专利]肌酐衍生物、肌酐免疫原及其特异性抗体与肌酐检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，具体涉及一种肌酐衍生物、肌酐免疫原及其特异性抗体与肌酐检测试剂盒。

背景技术

肌酐(Creatinine)，其结构式如式(Ⅲ)所示：

肌酐是一种低分子量的含氮化合物，是人体内肌酸代谢的终产物。肌酐是临床常规肾功能指标之一，临床上主要用于严重肾小球病变引起的肾功能不全、肾炎、尿毒症等肾脏疾病的诊断和疗效观察等。血清肌酐升高意味着肾功能的损害，是了解肾脏功能的重要指标，同时对冠状动脉病变程度、高血压、糖尿病等有可靠的诊断价值；尿肌酐排出量可作为肌肉量的指标，肌酐的产生量比较恒定，当肾功能损伤不严重时，尿中肌酐的排泄量少受尿液浓缩和稀释的影响，故尿中肌酐浓度的测定常用作尿中其他物质排泄浓度的参照物。肌酐作为重要的肾功能指标，其含量检测为体外诊断，与供体无接触，无不良、致死报告，操作简单、快速，可广泛应用于临床，其临床应用的安全性和可靠性已得到验证。

肌酐测定的方法较多，目前国内外检测肌酐含量主要使用化学测定法(碱性苦味酸法)、高效液相色谱法、酶法等方法。碱性苦味酸法非特异的色素原干扰因素较多，需要与阳离子交换树脂法结合使用；高效液相色谱法不适用于大批量临床样本的检测，通常只能作为肌酐测定的参考方法；酶法虽然特异性较高、准确性较好，但是酶试剂价格昂贵、且不易保存。因此，这些方法都不适合临床广泛应用。目前市场上缺乏稳定性好、灵敏度高、特异性强的肌酐检测试剂，尤其是质量好的自动化检验试剂，因此，仍需要对现有的肌酐测定方法进行改进，以提供一种达到临床要求、实用性强、性价比高，可应用于全自动生化分析仪的肌酐 测定方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肌酐衍生物、肌酐免疫原及其特异性抗体与肌酐检测试剂盒，以改善现有技术中肌酐测定方法稳定性差、灵敏度低，无法进行自动化分析的缺陷。

根据本发明的一个方面，提供了一种肌酐衍生物，其具有式(Ⅰ)所示的结构式：

其中，R为连接基团-(CH₂)_n-COO-，n为1至20之间的整数。本发明的肌酐衍生物具备制备成具有免疫原性的肌酐免疫原的基本结构，为制备新的肌酐检测试剂提供了结构基础。

根据本发明的另一方面，还提供了一种肌酐免疫原，其具有式(Ⅱ)所示的结构式：

其中，R为连接基团-(CH₂)_n-COO-，n是1至20之间的整数，载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽。本发明的肌酐免疫原免疫原性高，能够刺激动物机体产生免疫应答，产生高效价的抗肌酐特异性抗体，且具有很强的反应原性，适合作为体外检测肌酐含量的竞争性试剂。

当n＝1时，上述肌酐免疫原中的R为-CH₂-COO-。适用于上述肌酐免疫原的载体通常情况下选用蛋白质作为载体，不过其他足够大的具备免疫原性的物质也可以作为载体。最常用的免疫原性载体包括血清蛋白，血蓝蛋白(KLH)和甲状腺球蛋白。本发明中的载体优选为血清蛋白。血清蛋白来源广泛、简单易得且免疫原性高。

根据本发明的又一方面，还提供了一种抗肌酐特异性抗体，由免疫原免疫动物后生产得 到，抗体由上述任一种肌酐免疫原免疫动物后生产得到。本发明中所指的“抗体”不仅仅指完整的蛋白分子抗体，也包括保留完整抗体特异性结合能力的多肽片断抗体或者多肽片段抗体的衍生物。本发明的抗体可以是为多克隆抗体也可以是单克隆抗体，优选为多克隆抗体。

本发明的抗体可以通过现有技术制备得到。获得多克隆抗体的典型方法是使用单一的免疫原，在加或者不加佐剂后，在动物的一个或者多个部位进行免疫，宿主动物包括：兔，山羊，小鼠，绵羊，豚鼠或马。持续免疫一直进行，直至抗体效价达到最高。动物定时采血得到适量的特异抗血清，抗血清可以纯化。单克隆抗体可通过体细胞杂交技术来制备。

根据本发明的再一方面，还提供了一种肌酐免疫原的制备方法，该制备方法包括制备上述肌酐衍生物的步骤和将上述肌酐衍生物与载体进行连接，得到肌酐免疫原的步骤。通过上述方法制备得到的肌酐衍生物与具有免疫原性的蛋白质或多肽连接在一起，即可得到本发明的具有强免疫原性的肌酐免疫原，且该制备方法操作简单。