[发明专利]一种中药制剂心速宁胶囊的检测方法

权利要求书

1.一种中药制剂心速宁胶囊的检测方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

Ⅰ、中药原料的鉴别：

(一)黄连的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物0.5-1g，研细加甲醇10-20ml，置水浴中加热回流15-30分钟，滤过，滤液浓缩至3-6ml，作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取黄连对照药材50mg，加甲醇10m1-20ml，置水浴中加热回流15-30分钟，滤过，滤液浓缩至3-6ml，制成对照药材溶液；

(3)盐酸小檗碱对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

(4)吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液，体积比为12∶6∶3∶3∶1为展开剂，置氨蒸气预饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点为盐酸小檗碱；

(二)枳实的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2-5g，研细，置50-100ml圆底烧瓶中，加甲醇20-40ml，置水浴中加热回流30-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml-50ml分三次加热溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用0.1mol/L盐酸调节PH至3，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml-30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml-5ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)柚皮苷对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一含0.5％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为6∶2∶3的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点为柚皮苷；

(三)人参的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物4-8g，研细，加三氯甲烷40-80ml，置水浴中加热回流1-1.5小时，弃去三氯甲烷提取液，药渣蒸干，加水饱和的正丁醇30-60ml，超声处理功率250W，频率40kHz 30-60分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次30-60ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)人参对照药材溶液制备：取人参对照药材1g，加三氯甲烷40-80ml，置水浴中加热回流1-1.5小时，弃去三氯甲烷提取液，药渣蒸干，加水饱和的正丁醇30-60ml，超声处理功率250W，频率40kHz30-60分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次30-60ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，制成对照药材溶液；

(3)人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rg1对照品溶液制备：取人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；

(4)吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水，体积比为13∶7∶2，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10﹪硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，Rf值偏小的为人参皂苷Re，Rf值偏大的为人参皂苷Rg1；

(四)苦参的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2-4g，研细，置50-100ml具塞瓶中，加0.1mol/L盐酸30-60ml，放置15分钟，混匀，滤过，滤液移至分液漏斗中，用1mol/L氢氧化钠溶液调PH至10，加氯化钠使饱和，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15-30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml-2ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)苦参对照药材溶液制备：取苦参对照药材0.5g，置50-100ml具塞瓶中，加0.1mol/L盐酸30-60ml，放置15分钟，混匀，滤过，滤液移至分液漏斗中，用1mol/L氢氧化钠溶液调PH至10，加氯化钠使饱和，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15-30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml-2ml使溶解，制成对照药材溶液；

(3)槐定碱对照品溶液的制备：取槐定碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；

(4)吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一含2％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比2∶4∶2∶1，10℃以下放置的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点是苦参；在与对照品色谱相应的位置上，显一个相同的棕色斑点为槐定碱；

(五)麦冬的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物4-8g，研细，加水20-40ml，加热至沸使溶解，放冷，滤过，滤液加盐酸0.5ml，加热煮沸，放冷，用三氯甲烷20-40ml振摇提取，分取三氯甲烷层，浓缩至约1-2ml，作为供试品溶液；

(2)麦冬对照药材溶液制备：取麦冬对照药材1g，加水20-40ml，煎煮10-20分钟，滤过，滤液加盐酸0.5ml，加热煮沸，放冷，用三氯甲烷20ml振摇提取，分取三氯甲烷层，浓缩至约1-2ml，作为对照药材溶液；

(3)吸取上述两种溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮，体积比4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

(六)甘草的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2-4g，研细，加盐酸1-2ml和乙醚15-30ml，加热回流提取1-2小时，放冷，滤过，滤液用水洗涤3次，每次5-10ml，弃去水液，挥干乙醚溶液，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)甘草次酸对照品溶液制备：取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10﹪磷钼酸乙醇溶液，于105℃加热约5分钟，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点为甘草次酸；

Ⅱ、中药有效成分黄连含量的测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛-水，体积比48∶52，1000ml中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸钠1.2g为流动相；检测波长为270nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于3500；

(2)对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备取中药制剂心速宁胶囊1粒的内容物，研细，取0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸，体积比100∶1的混合溶液25-40ml，密塞，称定重量，超声处理功率250W，频率40kHz，30-50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得每粒中药制剂心速宁胶囊的内容物含黄连以盐酸小檗碱C₂₀H₁₇NO₄·HCl计，不得少于8.0mg。