[发明专利]双羰基还原酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种双羰基还原酶突变体，其特征在于，所述双羰基还原酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO：9所编码的氨基酸序列发生突变的氨基酸序列，所述发生突变的氨基酸序列具有如下至少两个突变位点：第94位、第151位、第231位、第236位和第251位，且所述第94位的I突变为V、A或G；第151位的V突变为Q、N或S；第231位的F突变为W、Y或P；第236位的I突变为L、V或A；第251位的Q突变为H、R或K；或者所述双羰基还原酶突变体的氨基酸序列具有所述发生突变的氨基酸序列中的所述突变位点，且与所述发生突变的氨基酸序列具有90％以上同源性的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的双羰基还原酶突变体，其特征在于，所述双羰基还原酶突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4或者SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列；或者

所述双羰基还原酶突变体的氨基酸序列为与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4或者SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列具有95％以上同源性的氨基酸序列。

3.一种DNA分子，其特征在于，所述DNA分子编码权利要求1或2所述的双羰基还原酶突变体。

4.根据权利要求3所述的DNA分子，其特征在于，

所述DNA分子的序列为SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13或者SEQ ID NO：14所示序列；或者

所述DNA分子的序列为与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13或者SEQ ID NO：14具有95％以上同源性的序列。

5.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒含有权利要求3或4所述的DNA分子。

6.根据权利要求5所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为pET-22b(+)、pET-22b(+)、pET-3a(+)、pET-3d(+)、pET-11a(+)、pET-12a(+)、pET-14b(+)、pET-15b(+)、pET-16b(+)、pET-17b(+)、pET-19b(+)、pET-20b(+)、pET-21a(+)、pET-23a(+)、pET-23b(+)、pET-24a(+)、pET-25b(+)、pET-26b(+)、pET-27b(+)、pET-28a(+)、pET-29a(+)、pET-30a(+)、pET-31b(+)、pET-32a(+)、pET-35b(+)、pET-38b(+)、pET-39b(+)、pET-40b(+)、pET-41a(+)、pET-41b(+)、pET-42a(+)、pET-43a(+)、pET-43b(+)、pET-44a(+)、pET-49b(+)、pQE2、pQE9、pQE30、pQE31、pQE32、pQE40、pQE70、pQE80、pRSET-A、pRSET-B、pRSET-C、pGEX-5X-1、pGEX-6p-1、pGEX-6p-2、pBV220、pBV221、pBV222、pTrc99A、pTwin1、pEZZ18、pKK232-18、pUC-18或pUC-19。

7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求5或6所述的重组质粒。

8.根据权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括原核细胞、酵母或真核细胞；优选所述原核细胞为大肠杆菌BL21细胞或大肠杆菌DH5α感受态细胞。

9.一种生产3R，5S-二羟基化合物的方法，包括双羰基还原酶对二酮类化合物进行催化反应的步骤，其特征在于，所述双羰基还原酶为权利要求1或2所述的双羰基还原酶突变体。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述二酮类化合物为通式I所示的酮类化合物：

其中，R1选自芳香基、烷基、环烷基、烷基取代的芳香基、卤素取代的芳香基、芳烷杂环基、环状杂烷基或环状杂烷化烷基；R2选自烷基、环烷基、卤烷基或卤环烷基；优选所述二酮类化合物选自6-苄氧基-3，5-二氧代-己酸叔丁酯、6-苄氧基-3，5-二氧代-己酸新戊酯、6-苄氧基-3，5-二氧代-己酸甲酯或者6-苄氧基-3，5-二氧代-己酸乙酯。