[发明专利]一种生地脱毒组培快繁的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物脱毒组培快繁技术领域，尤其涉及一种生地脱毒组培快繁 的方法。

背景技术

生地是玄参科多年生草本植物，株高25～40cm，全植株被灰白色长柔毛和 腺毛，其根壮茎肥厚肉嫩，呈块状、圆柱形或组锤形，根茎直径一般为2.5～ 5.5cm，表面显橘黄色，有半月形节及芽痕。其根部入药，味甘苦性大寒，具有 泻小肠火，清燥金，平诸血逆，消瘀通经等功效，是我国传统中药材之一。生 地的适应性强，多生长于排水良好的沙地、荒坡、地埂边，它性喜阳光，适宜 在疏松肥沃的土壤中种植。

目前，生地栽培以根茎繁殖为主，常用方法是选地后施肥并整平，将种根 截成3～5cm的小段，以行株距25×20cm开穴，再将截取的种根小段放入种植 穴内并覆土，在15～20℃条件下，10天左右出苗，一般亩用种量40～50kg；然 后根据苗势情况做好后期管理。这种方法操作简单、投资成本较低，但生地易 感染病害，对前茬作物要求很严，忌豆科、茄科、葫芦科、十字花科连作，采 用上述方法种植时，对前茬作物种类限制极大，这就导致种植面积受限，不利 于生地的大规模、连续化种植。更重要的是，土壤中或多或少寄生着病菌微生 物，这些微生物极易感染生地种根小段，使得生地不能正常出苗，或者出苗后 使得苗势不利，不仅影响了生地的产量，还对生地药材的品质造成了影响，病 菌微生物大量损耗药材中的有效成分，导致药效成分降低，品质下降。

发明内容

本发明目的是克服以上存在不足，提出一种无需切取微小植物茎尖，以3～ 5cm的种根小段为外植体，经消毒灭菌、诱导培养、增殖培养、生根培养后，获 得有根组培苗，然后移栽于基质培养基中成苗培养，即可得到脱毒组培苗。

本发明目的通过以下技术方案来实现：

一种生地脱毒组培快繁的方法，按如下步骤进行：

1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所 含重量为：

①基本培养基：选用MS培养基，蔗糖或白糖30～40g/L，琼脂10～15g/L， 木屑3～5g/L，沙壤土10～15g/L，pH6.5～7.2；

②诱导培养基：MS中添加6-BA0.8～1.5mg/L、NAA0.15～0.5mg/L、小球 藻粉2～3g/L，75％酒精0.01～0.02mg/L；

③愈伤组织分化培养基：MS中添加6-BA2.5～3.0mg/L和NAA0.2～ 0.3mg/L；

④增殖培养基：MS中添加6-BAl.0mg/L和NAAO.5mg/L；

⑤生根培养基：1/2MS中添加IBA0.12mg/L；

2)外植体的选取与灭菌：取生地的种根，将其截成3～5cm的小段，经灭菌 处理，作为脱毒组培用的外植体；

3)诱导培养：将步骤2)灭菌处理后的种根小段接种在诱导培养基上，培养 形成愈伤组织，再将愈伤组织移植至分化培养基诱导出丛芽，形成无根组培苗、 珠芽和小块根；

4)增殖培养：将步骤3)形成的无根组培苗、珠芽和小块根接种在增殖培养 基上，诱导出丛芽，形成无根组培苗、珠芽和小块根；

5)生根培养：将步骤4)增殖形成的无根组培苗、珠芽和小块根接种在生根 培养基中进行生根培养；

6)移栽：当步骤5)的生根组培苗生长至3～5cm、生根珠芽0.3～0.7cm， 生根小块根直径0.5～1.0cm，移栽基质培养至成苗。

进一步，所述的灭菌处理是将种根小段置于5～15℃的条件下，采用紫外线 消毒处理，然后浸泡于30～35℃的75％酒精溶液中，浸泡时间为3～5min，然后 用无菌水冲洗掉酒精溶液。

更进一步，所述的种根小段截取时，是以60°的斜截面斜切的，并用0.01％ α-萘乙酸钠喷淋斜截面。

进一步，所述的移栽基质是泥炭：沙壤土：蛭石按体积比1：3：1配制而 成。

与现有生地根茎繁殖方法相比，本发明的有益效果是：

1)本发明利用生地种根小段作为脱毒组培的外植体，由于体积较大，接种 操作容易；接种污染率只有5％左右或更低，而茎尖培养接种大多数情况下污染 率约40～80％；接种成功率高可达100％，而茎尖培养接种成活率一般只有20～ 40％；可比茎尖脱毒培养提早1～2个月获得脱毒组培苗，降低了成本，实用易 推广；