[发明专利]一株高油脂含量的微藻藻株及其获得方法

权利要求书

1.一株高油脂含量的微藻藻株，其特征在于：该藻株来源为小球藻，采用超高压诱变方法结合荧光法筛选获得，其生物保藏编号为CCTCC NO：M2014628。

2.权利要求1所述的微藻藻株的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)将小球藻混合到BG11培养液中，常规培养后使其细胞数至少达到10000个/ml，取上述培养后的藻液1ml加入到1000ml新制BG11培养液中，之后用1mol/L的盐酸溶液调节上述培养液的PH值为6.5-7；之后利用超高压进行微藻的诱变，诱变时间为0.5-6h，诱变压力为400-800MPa；

(2)小球藻诱变藻株的分离

取上述诱变处理后的小球藻藻液20ml，放置于20-30℃条件下，黑暗处理24h-48h；取黑暗处理后的小球藻藻液，用显微镜观察分离的小球藻细胞的存活情况，对存活下来的小球藻细胞进行单个小球藻细胞的分离培养：具体过程为将单个小球藻直接置于10ml新制BG11培养液内，光照条件为1500-3000lx、温度20-30℃的情况下，光暗比为12:12的条件下，培养50-70h；

(3)诱变藻株扩培

将经过步骤(2)培养所得的诱变藻株藻液按照1：3的体积比直接接种到新的BG11培养液内，利用培养瓶对其进行培养，条件是光照为1500-3000lx，光暗比为12:12，温度20-30℃，通二氧化碳培养；培养15-30天，之后即可测定培养瓶中藻液的油脂含量；

(4)诱变藻株油脂含量测定

配制油脂含量为0.0189mg/ml、0.0377mg/ml、0.0755mg/ml、0.1132mg/ml、0.1510mg/ml、0.1887mg/ml的小球藻藻液作为标准样品，步骤(3)中获得的藻液作为待测样品；

取24孔荧光孔板，每孔加入200ul标准样品藻液和2ul 0.1mg/ml尼罗红染料，反应7min，荧光酶标仪在540nm光激发光下，检测680nm处的荧光强度，绘制标准曲线；

所获得的标准曲线：y＝0.5547x+0.0842R²＝0.9712

其中，x为样品中的油脂含量(mg/ml)，y为荧光度；

按照同样的方法测定待测样品680nm处的荧光强度，然后按照标准曲线计算出待测样品的油脂含量，测定油脂含量最高的微藻藻株即为目标藻株。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中的诱变时间为2h，诱变压力为400MPa。