[发明专利]一株高油脂含量的微藻藻株及其获得方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物育种领域，具体涉及一株高油脂含量的微藻藻株及其获得方法。

背景技术

藻类生物燃料是全球可再生资源系统的重要组成部分。微藻中的油脂作为生物燃料的主要形式，是利用微藻中的油脂在催化剂条件下进行反应所制备的生物柴油，与传统的生物燃料相比，藻类生物燃料具有更多的优势。例如，产油藻类的油脂产率明显高于普通的产油作物。在相同的占地面积条件下，某些藻类的油脂年产量可高达大豆的60倍、麻风树的15倍及棕榈树的5倍。且与石油柴油相比，生物柴油具有不污染环境、可再生等特点，可作为新能源取代或者部分代替石油柴油。

随着世界范围内石油供应的下降，发展中国家的崛起及对石油消耗的增加，全球的石油危机将更加严重。另外，化石能源的燃烧过程会产生大量温室气体，从而带来全球变暖等环境问题。故而需要大量生物燃料提供足够的原材料。

薇藻具有油脂含量高，培养成本低、繁殖速度快等优点，是一类非常具有发展前景的生物燃料原料。但相对而言，微藻规模化培养后油脂含量不稳定，如何选育一种可以持续稳定油脂含量的微藻新藻株，能够解决生物燃料原料不足的问题，这正是现在亟待解决的问题。

发明内容

本发明针对现有藻株规模化培养后油脂含量不稳定的情况，提供了一株高油脂含量的微藻藻株及其获得方法，该藻株来源于小球藻，并通过超高压诱变处理，使小球藻发生变异，之后利用细胞分离技术分离出变异藻株，并对其进行扩大培养，之后采用荧光法筛选出高油脂含量的微藻藻株并进行生物保藏，生物保藏编号为CCTCC NO：M2014628。本发明通过超高压诱变育种技术结合定向筛选方法筛选出高油脂含量的微藻藻株，得到的变异藻株相比原藻株油脂含量由32％提高至45％以上。

本发明所采用的藻株，来源于小球藻，具体采用从上海光语生物科技有限公司购得的中国小球藻(GY-H6Chlorella sp.)藻株。

本发明利用上述的小球藻，采用超高压诱变方法结合荧光法筛选获得了一株新的藻株，制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)将小球藻混合到BG11培养液中，常规培养后使其细胞数至少达到10000个/ml，取上述培养后的藻液1ml加入到1000ml新制BG11培养液中，之后用1mol/L的盐酸溶液调节上述培养液的PH值为6.5-7；之后利用超高压进行微藻的诱变，诱变时间为0.5-6h，诱变压力为400-800MPa；

(2)小球藻诱变藻株的分离

取上述诱变处理后的小球藻藻液20ml，放置于20-30℃条件下，黑暗处理24h-48h；取黑暗处理后的小球藻藻液，用显微镜观察分离的小球藻细胞的存活情况，对存活下来的小球藻细胞进行单个小球藻细胞的分离培养：具体过程为将单个小球藻直接置于10ml新制BG11培养液内，光照条件为1500-3000lx、温度20-30℃的情况下，光暗比为12:12的条件下，培养50-70h；

(3)诱变藻株扩培

将经过步骤(2)培养所得的诱变藻株藻液按照1：3的体积比直接接种到新的BG11培养液内，利用培养瓶对其进行培养，条件是光照为1500-3000lx，光暗比为12:12，温度20-30℃，通二氧化碳培养；培养15-30天，之后即可测定培养瓶中藻液的油脂含量；

(4)诱变藻株油脂含量测定

配制油脂含量为0.0189mg/ml、0.0377mg/ml、0.0755mg/ml、0.1132mg/ml、0.1510mg/ml、0.1887mg/ml的小球藻藻液作为标准样品，步骤(3)中获得的藻液作为待测样品；

取24孔荧光孔板，每孔加入200ul标准样品藻液和2ul 0.1mg/ml尼罗红染料，反应7min，荧光酶标仪在540nm光激发光下，检测680nm处的荧光强度，绘制标准曲线；

所获得的标准曲线：y＝0.5547x+0.0842R²＝0.9712

其中，x为样品中的油脂含量(mg/ml)，y为荧光度；

按照同样的方法测定待测样品680nm处的荧光强度，然后按照标准曲线计算出待测样品的油脂含量，测定油脂含量最高的微藻藻株即为目标藻株，发明人对其进行生物保藏，其生物保藏编号为CCTCC NO：M2014628。