[发明专利]一种从肠衣中提取肝素钠的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说涉及从猪肠衣中在加工提取肝素钠的新工艺。

背景技术

肝素钠是一种抗凝血类原料药，是一种高度硫酸化的黏多糖硫酸酯钠盐，最早是由Mclean等人在狗的肝脏组织里分离出的一种天然产物，经过活性研究发现，此天然产物具有凝血作用。后来肝素具有的最优的作用抗凝血性被科学家Brinkhous等人进一步确认和证实了。随着科学技术的进步和发展，越来越多的科学家对肝素钠表现出了极大的兴趣，也推动肝素钠的研究，Charles等人最早作为抗凝血剂应用到临床上的研究，在此之后肝素钠作为商业产品大量应用，肝素钠在抗凝血方面表现出的优越性在全世界产生了广泛的影响，受到了各个国家的广泛重视。

发明内容

本发明提供一种从肠衣中提取肝素钠的新工艺，丰富了肝素钠的制备来源，创造了巨大的社会经济效益。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一、新树脂的处理方法

（1）、将树脂置于较大的容器内，用清水且最好用纯水漂洗干净，抽干，用80~90%工业酒精（或无水乙醇）浸泡24小时左右，洗去树脂中的有机杂质，抽干。（酒精可回收）

（2）、用40-50℃热水反复清洗至无酒精味，抽干。

（3）、用2倍于树脂量的4%HCl溶液浸泡2~3小时，并不断地翻动，用纯水洗至近中性。

（4）、用2倍于树脂量的4%(1mol/L)NaOH溶液浸泡2小时，用纯水洗至近中性，抽干。

（5）、最后再用2倍于树脂量的4%HCl溶液浸泡3~4小时，并不断搅拌，用纯水洗至近中性，用23%(4mol/L)NaCl溶液浸泡2小时，用水洗净盐水，抽干，备用。

二、肠衣提取肝素钠

（1）将肠衣投入反应锅中，按肠衣重的5%加入胰蛋白酶，用3mol/L的NaOH溶液调pH为8~9之间，同时搅拌升温达40℃时左右，维持2.5h后，升温达60℃时，按肠衣重的2%加入NaCl固体，然后升温到90℃，调pH为6~7之间，保持10min后直接加热到沸腾，然后趁热用200目尼龙筛子过滤。

三、吸附

待滤液冷却至60℃左右时，用3mol/L的NaOH溶液调pH8～9之间，然后加入已处理好的树脂，加量为滤液量的5%，搅拌吸附6h后，静置1h，用200目尼龙筛子过滤。整个吸附过程的pH保持8～9。

四、脱附

在树脂中加入等体积自来水漂洗数次，再用3mol/LNaCl溶液搅拌洗脱树脂2h，NaCl溶液的用量与树脂量相等；脱附后以200目尼龙筛子过滤，收集滤液。重复脱附两次，合并几次滤液。

五、沉淀

在滤液中加入等体积乙醇，搅拌10min，然后静置12h以上。

六、脱水干燥

收集下层沉淀物，乙醇脱水3次。将沉淀置于60℃烘箱中烘干得肝素钠粗品。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1：

一、新树脂的处理方法

（1）、将20KG树脂置于较大的容器内，用清水且最好用纯水漂洗干净，抽干，用90%工业酒精（或无水乙醇）浸泡24小时，洗去树脂中的有机杂质，抽干。（酒精可回收）

（2）、用50℃热水反复清洗至无酒精味，抽干。

（3）、用40L的4%HCl溶液浸泡3小时，并不断地翻动，用纯水洗至中性。

（4）、用40L的4%(1mol/L)NaOH溶液浸泡2小时，用纯水洗至中性，抽干。

（5）、最后再用40L的4%HCl溶液浸泡4小时，并不断搅拌，用纯水洗至中性，用23%(4mol/L)NaCl溶液浸泡2小时，用水洗净盐水，抽干，备用。

二、肠衣提取肝素钠

（1）将50KG肠衣投入反应锅中，加水50KG，加 2.5KG胰蛋白酶，用3mol/L的NaOH溶液调pH为9，同时搅拌升温达40℃时，维持2.5h后，升温达60℃时，加入NaCl固体1KG，然后升温到90℃，调pH为7之间，保持10min后直接加热到沸腾，然后趁热用200目尼龙筛子过滤。

三、吸附

待滤液冷却至60℃时，用3mol/L的NaOH溶液调pH9之间，然后加入已处理好的树脂25KG，搅拌吸附6h后，静置1h，用200目尼龙筛子过滤。整个吸附过程的pH保持9。

四、脱附