[发明专利]粉大蕉枯萎病菌的二重PCR分子快速检测方法

权利要求书

1.一种粉大蕉枯萎病菌的二重PCR分子快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)设计粉大蕉枯萎病菌类群1和类群2特异引物，引物序列如下：

(2)对样本进行处理，抽提样本DNA；

(3)以样本DNA为模板，使用粉大蕉枯萎病菌类群1和类群2特异引物进行二重PCR扩增反应；

(4)用1.2％-1.5％琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，当PCR产物呈现755bp的扩增条带时，即表明样本中含有大蕉枯萎病菌，当PCR产物呈现590bp的扩增条带时，表明样本中含有粉蕉或大蕉枯萎病菌。

2.根据权利要求1所述的粉大蕉枯萎病菌的二重PCR分子快速检测方法，其特征在于：步骤(2)中所述的样本为粉蕉或大蕉病菌，所述抽提样本DNA的方法为利用改进的SDS法抽提粉蕉或大蕉枯萎病菌菌丝的DNA。

3.根据权利要求1所述的粉大蕉枯萎病菌的二重PCR分子快速检测方法，其特征在于：步骤(2)中所述的样本为香蕉植株组织，所述抽提样本DNA的方法为利用CTAB法抽提香蕉植株组织中的DNA,所选取的香蕉组织部位为香蕉根、球茎或假茎组织。

4.根据权利要求1所述的粉大蕉枯萎病菌的二重PCR分子快速检测方法，其特征在于：步骤(2)中所述的样本为土壤，所述抽提样本DNA的方法为使用土壤基因组DNA快速提取试剂盒提取疑感染的土壤DNA。

5.根据权利要求1所述的粉大蕉枯萎病菌的二重PCR分子快速检测方法，其特征在于：步骤(3)所述的二重PCR扩增反应的反应条件为94℃预变性5min；94℃变性1min，65℃退火1min，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min。

6.根据权利要求1所述的粉大蕉枯萎病菌的二重PCR分子快速检测方法，其特征在于：步骤(3)所述的二重PCR扩增反应的体系50μL如下：

DNA模板2μL，含Mg²⁺的10×PCR buffer 5μL，2.5mM的dNTP 5μL，10μM的DJTY8-F 1μL，10μM的DJTY8-R 1μL，10μM的FDJ6-F 1μL，10μM的FDJ6-R1μL，5U/μL的Taq酶0.5μL，ddH₂O 33.5μL，共50μL。