[发明专利]一种新型的脂肪酶

说明书

本申请提供了一种具有脂肪酶活性的多肽，其包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在上述序列中包含至少一个氨基酸取代、缺失或添加的序列。本申请还提供了编码所述多肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体和宿主细胞，以及生产上述多肽的方法。此外，还涉及上述具有脂肪酶活性的多肽的用途。

发明领域

本申请属于基因工程或酶工程领域，具体地，涉及具有脂肪酶活性的多肽、其编码核酸，以及包含所述编码核酸的表达载体和宿主细胞。本申请还涉及上述多肽的制备方法及其用途。

发明背景

脂肪酶是一类具有多种催化能力的酶，可以催化三酰甘油酯水解为甘油和游离脂肪酸，还可以催化其他酯类的水解和转酯化以及酯类的合成反应。此外，脂肪酶还表现出对底物的对映选择性。以上特性赋予了脂肪酶在食品油脂加工、洗涤剂、生物柴油、酯键化合物的合成和手性药物合成等工业的广泛应用(Abhishek Kumar Singh,MausumiMukhopadhyay.Overview of Fungal Lipase:A Review.2012,166(2):486-520)。

例如，在油脂加工方面，由于脂肪酶的引入，油脂水解可在常温常压下进行，因此不会使高度不饱和脂肪酸和生育酚等生物物质变性。在医疗方面，脂肪酶作为诊断工具，可预测疾病，如血清中脂肪酶可用于检测急性胰腺炎和胰腺损伤。脂肪酶在药物生产、减轻体重等方面也有应用。在生物柴油合成方面，酶法具有提取纯化工艺简单、设备投资少、耗能低、污染小等优点，日益引起人们的普遍关注，其中织物膜固定化的Novozym 435和假丝酵母(Candida sp.)99-125是生产生物柴油的常用酶。在洗涤工业方面，1988年，诺维信公司首先将含脂肪酶且能有效除去油污的洗涤剂推向市场，应用遗传工程开发出洗涤剂用脂肪酶更是现代生物技术大规模工业化最成功的应用之一。在纸浆和造纸工业，脂肪酶被用来除去纸浆中的“洽脂”，日本Nippon纸业研制了一种“洽脂”控制方法，即用Candida rugasa脂肪酶水解甘三酯，水解度达90％。

脂肪酶催化乳脂肪的水解，产生游离脂肪酸。脂肪酸可以包括短链(C₄-C₆脂肪酸，即丁酸、己酸)和中到长链(C₁₂-C₁₈)脂肪酸。随后游离脂肪酸可参与化学反应，例如香味化合物，如乙酸乙酯、β-酮酸、甲基酮、酯和内酯的形成。使用的脂肪酶可以影响乳酪中释放的游离脂肪酸的类型，例如，辛辣的、强烈的香味主要产生于释放短链脂肪酸(C₄-C₆)的脂肪酶，而中长链脂肪酸则会产生肥皂样的口味。许多研究致力于将脂肪酶改造为短链偏好型，以应用于乳酪制造。

发明概述

第一方面，本申请提供了具有脂肪酶活性的多肽，其包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：

(a)如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，以及

(b)由(a)所述的序列经过取代、缺失或添加至少一个氨基酸后得到的序列，其中由(b)获得的多肽变体仍保持脂肪酶活性。

在任选的实施方案中，上述多肽与异源多肽融合。

在一实施方案中，本申请的多肽包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。在优选的实施方案中，上述多肽由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成。

第二方面，提供了编码第一方面的多肽的多核苷酸，其包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：

(a)核苷酸序列，其编码SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在上述序列中包含至少一个氨基酸取代、缺失或添加的序列；以及

(b)在严格条件下与a)中的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。

在一实施方案中，本发明的多核苷酸包含SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。在优选的实施方案中，上述多核苷酸由SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列组成。