[发明专利]一种基于混合探针基因芯片检测方法

权利要求书

1.一种基于混合探针基因芯片检测方法，其特征在于，该方法包括以下几个步骤：

步骤一：样品制备

制备含有目的探针（3）的溶液，和第一荧光基团（1）标记的质量控制探针（4）的溶液；并将上述目的探针（3）的溶液和第一荧光基团标记（1）标记的质量控制探针（4）的点样溶液充分混合，制备成点样溶液；

步骤二：基因芯片制备

将上述混合后的溶液点样于修饰了手臂分子（6）的基片（7）上形成N个探针斑点，N为自然数，经过固定并清除未固定的探针，完成基因芯片的制备；

步骤三：通过检测质量控制探针（4）的信号检测目的探针（3）通过手臂分子（6）固定在基片（7）上；

检测上述所有探针斑点发出的荧光信号，若在第一荧光基团（1）的激发波长下检测到荧光，则表示质量控制探针（4）通过手臂分子（6）固定在基片（7）上，同时说明目的探针（3）通过手臂分子（6）固定在基片（7）上；

否则，若任一个探针斑点中在第一荧光基团（1）的激发波长下未检测到荧光，表示质量控制探针（4）未通过手臂分子（6）固定在基片（7）上。

2.根据权利要求1所述的基于混合探针基因芯片检测方法，其特征在于，还包括以下步骤：

步骤四：杂交

将第二荧光基团（2）标记的待测序列（5）与质量合格基因芯片上所述的探针斑点中的目的探针（3）进行杂交，杂交后，目的探针（3）中的探针和待测序列（5）结合形成杂交产物；

步骤五：确定待测序列（5）的序列信息

对所述杂交产物进行荧光信号检测，若在第二荧光基团（2）的激发波长下检测到荧光，则确定目的探针（3）与待测序列（5）互补，并确定待测序列（5）的序列信息；

若在第二荧光基团（2）的激发波长下未检测到荧光，则表示不能确定目的探针（3）与待测序列（5）互补，无法确定待测序列（5）的序列信息。

3.根据权利要求2所述的基于混合探针基因芯片检测方法，其特征在于，所述的目的探针（3）和质量控制探针（4）为脱氧核糖核酸、核糖核酸或者肽核酸。

4.根据权利要求2所述的基于混合探针基因芯片检测方法，其特征在于，所述的基片（7）为玻璃片、硅胶晶片、塑料、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜、微型磁珠或者管盖。

5.根据权利要求2所述的基于混合探针基因芯片检测方法，其特征在于，所述的第一荧光基团（1）和所述的第二荧光基团（2）不相同，且上述两种荧光基团的荧光发射峰大于40nm。

6.根据权利要求5所述的基于混合探针基因芯片检测方法，其特征在于，所述的第一荧光基团（1）和所述的第二荧光基团（2）为Cy3、Cy5、Fitc、FAM或者Rhodamine。

7.根据权利要求5所述的基于混合探针基因芯片检测方法，其特征在于，所述的第一荧光基团（1）和第二荧光基团（2）为生物素-亲和素与标记物质结合的标记复合物。

8.根据权利要求7所述的基于混合探针基因芯片检测方法，其特征在于所述的标记物质为荧光蛋白、铁蛋白、胶体金、荧光素或化学发光物质。