[发明专利]荸荠皮提取荸荠乙素的方法

权利要求书

1.一种荸荠皮提取荸荠乙素的方法，包括提取、萃取；其特征在于：其具体步骤如下：

(1)将新鲜的荸荠皮风干，粉碎，备用；以重量计，称取荸荠皮粉末1份加入提取罐中，每次加入4-10份70％体积百分比的丙酮水溶液，在25℃下浸泡24h，浸泡3次；过滤，合并滤液，减压浓缩至膏状，获得提取物；

(2)以重量计，取步骤(1)的提取物1份，分散在5份水中，制成悬浊液，每次加入5-10份乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并萃取液，减压浓缩至干,得萃取物；

(3)以重量计，取步骤(2)的萃取物1份，加入甲醇至完全溶解，用2-4份聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，以甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90％体积百分比的洗脱液，减压浓缩至干,得粗品A；

(4)以重量计，取步骤(3)的粗品A1份，加入甲醇至完全溶解，加入2-4份聚酰胺拌样，将甲醇挥发干，转入聚酰胺色谱柱进行分离，用体积比为5:1-2:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，以石油醚:乙酸乙酯:甲酸＝50:49:1的混合液作展开剂，用薄层色谱法检测，收集合并R_f为0.7的洗脱液，减压浓缩至干,得粗品B；

(5)以重量计，取步骤(4)的粗品B1份，溶于4-8份甲醇中，加入等甲醇体积的水制成悬浊液，用Sephadex LH-20凝胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，以石油醚:乙酸乙酯:甲酸＝50:49:1的混合液作展开剂，用薄层色谱法检测，收集合并R_f为0.7的洗脱液，减压浓缩，得粗品C；

(6)以重量计，取步骤(5)的粗品C1份，溶于2-5份甲醇中，以280nm为紫外检测波长，以62-68％体积百分比的甲醇水溶液为流动相，用4.6mm×25cm的Zorbax SB-C18柱进行高效液相色谱分析，用9.4mm×25cm的Zorbax SB-C18柱进行半制备纯化，按21.38—32.51min的出峰时间，收集色谱峰中阀值不小于20mAU的洗脱液，减压浓缩，即得产品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的所述的MCI柱规格为70×460mm，填充材料为MCI-gel CHP-20P，柱色谱条件为：柱压为80Psi，流动相流速为50mL/min，检测波长为245nm；所述的流动相为40-100％体积百分比的甲醇水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中所述的聚酰胺规格为200-300目；所用洗脱液为体积比为5:1-3:1的氯仿-甲醇溶液。