[发明专利]荸荠皮提取荸荠乙素的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种荸荠乙素的提取分离方法，特别是涉及一种从荸荠皮中提取分离荸荠乙素的方法。

背景技术

荸荠(Eleocharis tuberosa)，又称马蹄，属莎草科多年生浅水草本植物荸荠的地下球茎，我国大部分地区都有栽培。其中，广西荸荠产量占全国70％，贺州荸荠产量占广西70％。据文献报道，荸荠有抗菌、抗肿瘤、防治呼吸道疾病、利肠通便和利尿排淋等作用；临床上可用于治疗咽喉疼痛、痰热咳嗽、热病烦渴、小便不利、痢疾等症。研究表明，荸荠的活性物质主要富集在果皮和果肉之间。在荸荠加工过程中，被丢弃的荸荠皮质量约占新鲜荸荠质量的25％，资源非常丰富。我们在荸荠皮活性成分提取分离研究中发现荸荠乙素，属于二氢黄酮化合物。荸荠乙素为圣草酚的衍生物。该化合物具有抗氧化、抗炎、镇痛等多种药理活性以及调节心血管系统、保护神经系统、利尿、改善糖尿病等作用，在食品上常用作饮料、食品和酒类的抗氧化剂。荸荠乙素结构特别，属于圣草酚的苯并吡喃衍生物。该类衍生物因具有显著的抗HIV、抗肿瘤等活性而受到广泛的关注。荸荠乙素存在于莎草科植物荸荠的果皮中。荸荠乙素是从荸荠皮中分离得到新化合物。

目前，未见从荸荠皮中提取分离荸荠乙素的文献报道。经中国公开专利检索，没有发现与本专利申请相同的技术方案。

发明内容

本发明的目的在于：提出一种荸荠皮提取荸荠乙素的方法。

荸荠乙素化学结构式如下：

本发明的荸荠皮提取荸荠乙素的方法，其特征在于:应用常规提取法和MCI、聚酰胺、凝胶以及半制备型高效液相色谱技术从荸荠皮中提取分离荸荠乙素，其具体步骤如下：

(1)将新鲜的荸荠皮风干，粉碎，备用；以重量计，称取荸荠皮粉末1份加入提取罐中，每次加入4-10份70％体积百分比的丙酮水溶液，在25℃下浸泡24h，浸泡3次；过滤，合并滤液，减压浓缩至膏状，获得提取物；

(2)以重量计，取步骤(1)的提取物1份，分散在5份水中，制成悬浊液，每次加入5-10份乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并萃取液，减压浓缩至干,得萃取物； 

(3)以重量计，取步骤(2)的萃取物1份，加入甲醇至完全溶解，用2-4份聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，以甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90％体积百分比的洗脱液，减压浓缩至干,得粗品A；

(4)以重量计，取步骤(3)的粗品A 1份，加入甲醇至完全溶解，加入2-4份聚酰胺拌样，将甲醇挥发干，转入聚酰胺色谱柱进行分离，用体积比为5:1-2:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，以石油醚:乙酸乙酯:甲酸＝50:49:1的混合液作展开剂，用薄层色谱法检测，收集合并Rf为0.7的洗脱液，减压浓缩至干,得粗品B；

(5)以重量计，取步骤(4)的粗品B 1份，溶于4-8份甲醇中，加入等甲醇体积的水制成悬浊液，用Sephadex LH-20凝胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，以石油醚:乙酸乙酯:甲酸＝50:49:1的混合液作展开剂，用薄层色谱法检测，收集合并Rf为0.7的洗脱液，减压浓缩，得粗品C；

(6)以重量计，取步骤(5)的粗品C 1份，溶于2-5份甲醇中，以280nm为紫外检测波长，以62-68％体积百分比的甲醇水溶液为流动相，用4.6mm×25cm的Zorbax SB-C18柱进行高效液相色谱分析，用9.4mm×25cm的ZorbaxSB-C18柱进行半制备纯化，按21.38—32.51min的出峰时间，收集色谱峰中阀值不小于20mAU的洗脱液，减压浓缩，即得产品。

所述步骤(3)中的所述的MCI柱规格为70×460mm，填充材料为MCI-gelCHP-20P，柱色谱条件为：柱压为80Psi，流动相流速为50mL/min，检测波长为245nm；所述的流动相为40-100％体积百分比的甲醇水溶液。

所述步骤(4)中所述的聚酰胺规格为200-300目；所用洗脱液为体积比为5:1-3:1的氯仿-甲醇溶液。 

所述步骤(6)中的所用色谱柱为Zorbax SB-C18(9.4mm 25cm)柱；所述甲醇浓度范围为62-68％体积百分比。

本发明与现有技术相比其有益效果是：设计科学合理，利用废弃的荸荠皮为原料提取分离得到荸荠乙素，分离效果好，产品纯度高，使荸荠皮变废为宝，所选用的层析材料MCI、聚酰胺、凝胶均可反复使用，原料易得，资源丰富，生产成本低，具有较好的应用前景。