[发明专利]一种人羧酸酯酶hCE2的高特异性荧光探针及其应用

权利要求书

1.一种人羧酸酯酶hCE2的高特异性荧光探针，其特征在于：该探针的底物的酯键可被hCE2特异性水解为相应水解产物并产生产物对应的荧光；

该底物为4-三氟甲基-7-羟基香豆素酯类衍生物，其结构通式如式(1)所示，其中，R为苯基、对甲基苯基、对乙基苯基、对丙基苯基、对己基苯基、对硝基苯基、对氯苯基、1-奈基、2-呋喃基、2-噻吩基、(4-苯基)苯基、4-乙氧基苯基取代基中的一种。

2.一种权利要求1所述人羧酸酯酶hCE2的高特异性荧光探针的应用，其特征在于：该探针底物作为hCE2的特异性底物，可利用其水解反应活性，通过定量检测单位时间内水解产物的生成量来测定不同酶源中hCE2的活性。

3.根据权利要求2所述人羧酸酯酶hCE2的高特异性荧光探针的应用，其特征在于：所述酶源为重组表达的hCE2单酶、人或动物组织制备液或各类组织细胞生物样品。

4.根据权利要求2所述人羧酸酯酶hCE2的高特异性荧光探针的应用，其特征在于：所述水解反应体系pH介于5.5～10.5之间；探针底物的浓度介于1/10～10K_m之间；孵育体系反应温度介于20～60℃之间，同时水解产物的转化率应介于0.1％～20％之间。

5.根据权利要求2所述人羧酸酯酶hCE2的高特异性荧光探针的应用，其特征在于：该探针底物不具备荧光而其水解产物具有荧光属性，可采用荧光检测器实现产物及底物的快速灵敏检测；荧光检测条件为：激发波长330～400nm，在420～660nm进行荧光发射谱的检测。

6.根据权利要求2所述人羧酸酯酶hCE2的高特异性荧光探针的应用，其特征在于：该特异性探针底物及其水解反应可用于hCE2抑制剂的快速筛选及抑制能力的定量评价。