[发明专利]一种肝素钠中多硫酸软骨素的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及肝素钠中多硫酸软骨素的检测方法。

背景技术

我国是肝素钠产量最大的国家，国际市场的肝素钠产品原料70％以上来自中国。随着需求的增加，肝素钠的价格一路攀升。2008年2约，美国因注射肝素钠出现4例死亡，多例不良反应的医疗事故，成为震惊世界的“肝素钠事件”。经有关专家分析，上述事故可能是因为与肝素钠中含有的多硫酸软骨素有关。商务部已通过中国医药保健品进出口商会和有关省、市商务主管部门向有关肝素钠出口企业发出紧急通知，要求在进料检验、生产管理和出厂检验环节严格把关，完善出口产品质量管理档案和售后质量跟踪体系，确保出口产品的质量安全。因此，对肝素钠中多硫酸软骨素进行检测成为肝素钠质量控制的重要一环。

发明内容

本发明提供了肝素钠中多硫酸软骨素的检测方法，对极低含量的多硫酸软骨素也能有效检测，灵敏度高达0.05％。本法准确度高，重现性好。

本发明采用如下技术方案予以实现：

一种肝素钠中多硫酸软骨素的检测方法，包括如下步骤：

1.称取多硫酸软骨素标准品适量加水溶解，制成OSCS标准溶液。

2.称取肝素钠标准品适量加水溶解，制成肝素钠标准溶液。

3.取OSCS标准溶液适量加入到肝素钠标准溶液中，制成系统适应性溶液。

4.称取肝素钠精品原料药适量加水溶解，制成待测样品溶液。

5.称取磷酸氢二钠，加适量水溶解，制成流动相A溶液，超声脱气备用。

6.称取高氯酸钠适量加水溶解，制成流动相B溶液，超声脱气备用。

7.使用安捷伦高效液相色谱色谱仪进行分析。

附图说明

图1为系统适应性溶液谱图，其中第一个峰为肝素峰，第二个峰为多硫酸软骨素峰。

图2为待测样品溶液谱图，图中只有一个肝素峰，未检出多硫酸软骨素峰，说明此肝素样品中无多硫酸软骨素。

具体实施方式

1.称取多硫酸软骨素标准品2.1mg，加水2.100mL溶解制成1mg/mL的OSCS标准溶液。

2.称取肝素钠标准品24.6mg，加水0.615mL溶解制成40mg/mL的肝素钠标准溶液。

3.取OSCS标准溶液12.3μL加入到肝素钠标准溶液中，制成多硫酸软骨素相对于肝素钠浓度为0.05％(w/w)的系统适应性溶液。

4.称取待测肝素钠样品95.6mg，加水2.390mL溶解制成40mg/mL的待测样品溶液。

5.称取1.0003g磷酸氢二钠，加水1000mL溶解,用20％磷酸溶液调节pH值为3.5，制成0.1％的流动相A，脱气备用。

6.称取280.0012g高氯酸钠，加水溶解，定容至1000mL,用20％磷酸溶液调节pH值为3.5，制成2mol/L的流动相B，脱气备用。

7.使用高效液相色谱仪按如下条件进行分析：

流速：0.3ml/min；

检测器：紫外检测器254nm；

进样体积：20μl；

色谱柱：2mmx250mm，IonPac AS11；

柱温箱温度：35℃；

流动相梯度：

时间流动相A(％)流动相B(％)0.0075255.00307010.00307015.00752524.007525