[发明专利]L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法

权利要求书

1.一种L-脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法，其特征在于，在有机溶剂中，使用衍生化试剂和L-脯氨醇及其异构体进行衍生化反应，制备得到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产品，然后使用正相高效液相色谱法进行分离和检测；

所述衍生化试剂选自乙酰扁桃酰氯、9-氯甲酸芴甲酯和氯甲酸苄酯中的一种；

所述有机溶剂选自下列溶剂中的一种或多种：二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氯化碳和四氢呋喃；

所述正相高效液相色谱法以正相色谱柱为分离柱，以正己烷-C1～C4低级醇组成正相流动相系统；所述C1～C4低级醇为异丙醇或乙醇；所述正相色谱柱是以表面涂敷有直链淀粉－(二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶，或表面涂敷有纤维素－(二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶，或表面涂敷有直链淀粉－三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶为固定相的手性色谱柱。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生化反应包括以下步骤：

1)室温下，在反应器中加入C1～C4的有机胺和L-脯氨醇及其异构体，C1～C4的有机胺与L-脯氨醇及其异构体的摩尔比为5∶1～1∶1，加入有机溶剂，搅拌均匀；

2)在步骤1)得混合物中加入衍生化试剂，搅拌反应5～60min，即得到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产品；

所述C1～C4的有机胺选自三乙胺、二乙胺和二异丙基乙胺中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)中搅拌反应30min。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述衍生化试剂是9-氯甲酸芴甲酯，L-脯氨醇及其异构体与9-氯甲酸芴甲酯用量的摩尔比为1∶1.1～1∶1.5。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正相流动相系统中低级醇占流动相的体积百分比为10％～30％。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述正相流动相系统中低级醇占流动相的体积百分比为15％～25％。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正相高效液相色谱法的色谱条件为：以正相色谱柱为分离柱，以正己烷-C1～C4低级醇组成正相流动相系统；流速为0.7～1.3mL/min；检测波长为255nm-275nm；色谱柱柱温为25℃～40℃。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述正相高效液相色谱法的色谱条件为：以正相色谱柱为分离柱，以正己烷-C1～C4低级醇组成正相流动相系统；流速为0.8mL/min；检测波长为265nm；色谱柱柱温为35℃。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正相高效液相色谱法包括以下步骤：

(a)取L-脯氨醇及其异构体衍生化产品，用流动相溶解，配制成每1mL含L-脯氨醇及其异构体0.03mg～0.08mg的样品溶液；

(b)设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为265nm，色谱柱柱温为35℃；

(c)取步骤(a)的样品溶液10μL注入色谱仪，记录色谱图。